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在现行的国内外药典中，胰酪大豆胨液体培养基主要用于药品的无菌检查，也可用于微生物限度检验（MPN法）、药品的模拟灌装试验、菌种活化等。此培养基营养丰富，同样也可做为基础培养基，加入特定成分进行改进，适用于多种微生物的培养（例如加入血液或血清可用于营养苛求型微生物的培养，加入特定的抗生素可用于某些特定菌群的选择性增菌培养基等，也可加入琼脂制成固体培养基使用）。
一、TSB的名称问题
由于不同标准命名和翻译的问题，导致TSB培养基存在多个名称，例如胰酪大豆胨液体培养基(Trypticase Soy Broth，TSB)、胰蛋白胨大豆肉汤、胰酪胨大豆肉汤、大豆酪蛋白消化物培养基（Soybean Casein Digest Medium，SCDM）、大豆-干酪素消化物培养基等，事实上这些培养基都是相同的配方：胰酪胨17.0g/L（用胰酶消化酪蛋白制成，也可以叫胰蛋白胨、酪蛋白胨，酪蛋白主要存在于奶或哺乳动物的肌肉组织中，因此习惯于将牛奶用胰酶消化制成的蛋白胨叫酪蛋白胨，由动物组织经胰酶消化制成的蛋白胨叫胰蛋白胨，这两种都可以叫胰酪胨），大豆蛋白胨3.0g/L（用木瓜蛋白酶水解大豆制成，因此也叫大豆木瓜蛋白酶水解物、大豆胨），氯化钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.5g/L，一水合葡萄糖2.5g/L，也就是EP标准、USP标准、CP标准、GB标准等使用的TSB其实是同一个培养基。就连化妆品标准使用的SCDLP培养基，其实也是以TSB为基础，加入卵磷脂和吐温80制成的。
二、TSB的微生物质控
TSB灵敏度和适用性检查：在无菌检查法部分，质控菌株为枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉，培养温度为20-25℃，接种量不大于100CFU，每株菌接种2个平行管，细菌的培养时间不超过3天，真菌的培养时间不超过5天。而在非无菌产品微生物限度检查：微生物计数部分，当使用MPN法进行计数时，也用到了TSB，在这一部分也要求对TSB进行检查，质控菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌，接种量不大于100CFU，培养温度为30-35℃，接种2个平行管，同时要求接种对照培养基（无菌检查法部分没有要求接种对照培养基），培养时间不超过3天。多数人使用TSB都是用于无菌检查，因此培养基的质量控制规程基本上是按照无菌检查法部分执行的，并没有注意到微生物限度检查部分的质量控制方法。
三、TSB的灭菌
TSB的灭菌方式：可以采用过滤除菌、高压蒸汽灭菌、辐照灭菌等多种方式均可，但要注意，TSB中含有少量的葡萄糖，特别是高压蒸汽灭菌时，过度的灭菌条件会导致葡萄糖出现不同程度的焦化，因此再进行灭菌时应提前对灭菌程序进行测试，确保执行的灭菌条件对培养基的质量不会造成不良影响。常见的TSB灭菌后出现颜色变深、变黑、pH下降等现象时，一般都是培养基受热过度导致，培养基灭菌结束后应及时取出降温，避免长时间的保温。
四、TSB的保存
在2015版中国药典中，制备好的培养基在2-25℃避光条件下，非密闭容器一般在3周内使用，保存在密闭容器中一般在一年内使用。而在2020版药典中，改为了在2-25℃避光条件下，在验证的效期内使用。TSB相对比较稳定，因含有少量葡萄糖，长期保存过程中pH会有下降，因此为了延长灭菌后的保存期限，应注意防止灭菌过度，pH可适当上调至7.4-7.5，确保培养基在保存期内的pH不会超出范围。TSB的灵敏度和适用性通常在一年保存期内不会有明显的变化。
五、TSB培养基灵敏度和适用性检查常见问题
在进行TSB的阳性菌接种测试时，经常遇到枯草芽孢杆菌不生长、白色念珠菌不生长，或者黑曲霉不生长的情况。或者做方法验证时使用洋葱伯克霍尔德氏菌、铜绿假单胞菌等进行接种测试，也可能遇到不生长的情况。这些情况并不一定是培养基质量的问题，大概率可能是缺氧导致。枯草芽孢杆菌是需氧菌，而白色念珠菌和黑曲霉是真核生物进行有氧呼吸，它们都需要充足的氧气才能较好的生长，一旦氧气不足，就可能导致生长缓慢或者不生长的现象出现。
（1）容器：装TSB的容器，应确保有足够的空气。若使用试管装TSB，最好使用粗一些的试管，装量通常在1/3左右，一般不超过1/2，使用透气的硅胶塞。若使用瓶装，上方应留有一定量的空气，锥形瓶可以使用透气塞，输液瓶培养时也可以在胶塞上插针头过滤器（一方面可以有充足的氧气，另一方面可能遇到微生物产气的现象，及时排出气体防止崩塞）。
（2）振荡：培养基长时间静置培养，可能逐渐导致底层氧气不足，微生物生长缓慢，因此在逐日观察结果期间，可将TSB轻轻振荡后再观察，一方面可以将沉底的菌体摇起来分散开方便观察，另一方面可以使氧气进入培养基中，有利于微生物的快速生长。
注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。
