亚硫酸盐琼脂培养基试管制备方法—铁粉沾到试管壁上了怎么办？

一、简介与问题

  亚硫酸盐琼脂培养基主要用于厌氧亚硫酸盐还原杆菌的试管计数。使用该培养基时，需要加入铁粉，培养时目标菌产生的H₂S与之反应，形成黑色的区域。由于铁粉需要使用人员单独加入，有客户反馈加入铁粉灭菌后，很多铁粉沾在试管壁上，即使用力摇晃也不能完全脱落。本文就此以对比试验的方式进行说明展示。

二、试验设置

  共设三组试验，第一组为试管中先加入培养基，再加铁粉；第二组为试管中先加入培养基，上面覆盖一层液体石蜡，再加铁粉（设置该组试验，是为了验证本公司另一个需要加入铁粉的产品-疱肉培养基即用型管的情况）；第三组为试管中先加入铁粉，使铁粉尽量不要粘附在试管壁上，然后再加入培养基。上述操作全部完成后，进行高压灭菌。

三、试验结果

  （1）灭菌前，第一组的铁粉全部在培养基上面；第二组部分铁粉沉到试管底部，部分铁粉透过液体石蜡留在培养基上面，液体石蜡表面也粘附一些铁粉；第三组铁粉全部在试管底部（如图1）。

图1 灭菌前三组试管中铁粉的状态

（从左到右依次为第一组、第二组、第三组）

  （2）灭菌后，不摇晃，第一组和第二组试管壁上粘附了很多铁粉，第三组试管壁上基本没有（如图2）。

图2 灭菌后三组试管中铁粉的状态

（从左到右依次为第一组、第二组、第三组）

  （3）灭菌后的试管进行摇晃，前两组试验试管上面浮着的铁粉会分散到培养基中，但是试管壁上粘附的铁粉很难脱落（如图3）。

图3 摇晃后三组试管中铁粉的状态

（从左到右依次为第一组、第二组、第三组）

  通过上面的试验，可以看出，在制备这款培养基试管时，建议先加入铁粉，且使铁粉全部落在试管底部，尽量不要粘在试管壁上，然后再加入培养基，进行灭菌操作。

四、怎样使铁粉分散

  试管中先加入铁粉，再加培养基，然后高压灭菌，灭菌完毕，铁粉依然沉积在试管底部，只要趁热充分振荡试管，即可分散到整个试管中（如图4）。

图4 沉积的铁粉混匀前后的状态

五、建议方法与要领

  如果配制的试管比较多，逐个试管加入铁粉会显得稍微繁琐，也可以采用下面几种办法，达到上面所说的效果。

  （1）将铁粉直接加入待煮培养基中，搅拌均匀，进行煮沸溶解，趁热分装，分装时要不停搅拌。这种情况下，不管凉水中先放入铁粉，还是热水中加入铁粉，灭菌后铁粉会分布在培养基所占体积的试管壁上，底部相对多一些（如图5）。

图5 铁粉与培养基一起搅拌溶解、灭后的状态

  （2）如果配制前忘记加铁粉，待培养基煮好后，也可以加入铁粉充分搅拌后，分装、灭菌，这样灭菌后，铁粉也会集中在试管底部，趁热摇匀，铁粉也能分散到整个试管中（如图6）。

图6 铁粉直接加入煮后的培养基中及灭菌后的状态

  综上，不管用哪种方式，只要保证灭菌前，铁粉不是漂浮在试管中的培养基上表面，且灭菌完毕后，及时趁热混匀，铁粉就能分散到试管中的培养基中，不会沾到试管上部的壁上，保证使用效果。

六、使用注意事项

  在加样时，需要趁热将样品加入试管中，颠倒数次，在沸水或蒸汽柜中放置15min（加热过程中也需颠倒试管数次），加热后迅速用水冷却试管，待试管内培养基完全凝固后，将试管预热至50℃-55℃厌氧培养48 h。有关结果判断，参考亚硫酸盐琼脂-点击查看。

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