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李氏菌増菌肉汤(LB1,LB2)基础培养基原理和使用方法

丁鑫鑫
录入时间:2024-10-15 16:39:20 来源:青岛海博生物

一、试验原理:

  本产品符合GB 4789.28-2024 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》。

  胰胨、多价胨和酵母膏提供氮源、维生素和生长因子;李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠,同时对部分杂菌起抑制作用;磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂;七叶苷为可发酵的糖类;萘啶酮酸和吖啶黄为选择性抑菌剂,抑制非李斯特氏菌的生长。


二、培养基配方(g/L):

胰胨

5.0

多价胨

5.0

酵母膏

5.0

氯化钠

20.0

磷酸氢二钾

12.0

磷酸二氢钾

1.4

七叶苷

1.0

pH 7.3±0.1 25℃


三、试验方法:

  粉体装培养基的使用:

  1. 称取本品49.4g, 加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌15分钟,冷却后备用。LB1液:每225ml培养基中加入1支萘啶酮酸(5.0mg/支)和1支吖啶黄素(3.0mg/支)

  2. 在无菌条件下分装试管,每支试管10ml。

  3. 制备质控菌液。

  4. 目标菌的接种。

  接种10CFU~100CFU的单核细胞增生李斯特氏菌,接种体积不超过1mL,同时接种两个平行管,混匀。将相同体积的目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释 度) 倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板) ,接种两个平板,作接种量计数用 。30℃需氧培养24h。

  5. 非目标菌的接种

  接种1000CFU~5000 CFU的大肠埃希氏菌、粪肠球菌 ,接种体积不超过1mL,同时接种两个平行管,混匀。同时将1mL菌悬液(比试管接种小10倍~100倍稀释度)倾注平板(或适宜 稀释度0.1mL 涂布平板),接种两个平板,作接种量计数用,30℃需氧培养24h。

  6.培养液的接种

  培养结束后,吸取10μL单核细胞增生李斯特氏菌培养液涂布至PALCAM琼脂,每管一个平板,置于36℃需氧培养48h。

  吸取10μL大肠埃希氏菌/粪肠球菌培养液分别涂布于TSA平板,每管一个平板,置于36℃需氧培养24h。


四、结果观察与解释

  接种以下质控菌株,30℃需氧培养24小时:

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

测试结果

质控评价标准

单核细胞增生李斯特氏菌

ATCC 19115

10-100

在PALCAM平板上菌落数多不可计;菌落呈灰绿色,中心凹陷黑色,周围有黑色

在PALCAM上>10CFU

灰色至黑色菌落,带有黑色晕环

大肠埃希氏菌

ATCC 25922

1000-5000

在TSA平板上菌落数为0/0

在TSA上<100CFU

粪肠球菌

ATCC 29212

1000-5000

在TSA平板上菌落数为0/0

在TSA上<100CFU


图1-1 李氏增菌肉汤LB1培养基微生物质控结果

备注:a:单核细胞增生李斯特氏菌,b:大肠埃希氏菌,c:粪肠球菌


图1-2  10μL单核细胞增生李斯特氏菌培养液涂布至PALCAM琼脂


五、注意事项

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。


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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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