一、试验原理:
本产品符合GB 4789.28-2024 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》。
胰胨、多价胨和酵母膏提供氮源、维生素和生长因子;李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠,同时对部分杂菌起抑制作用;磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂;七叶苷为可发酵的糖类;萘啶酮酸和吖啶黄为选择性抑菌剂,抑制非李斯特氏菌的生长。
二、培养基配方(g/L):
胰胨 |
5.0 |
多价胨 |
5.0 |
酵母膏 |
5.0 |
氯化钠 |
20.0 |
磷酸氢二钾 |
12.0 |
磷酸二氢钾 |
1.4 |
七叶苷 |
1.0 |
pH 7.3±0.1 25℃ |
三、试验方法:
粉体装培养基的使用:
1. 称取本品49.4g, 加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌15分钟,冷却后备用。LB1液:每225ml培养基中加入1支萘啶酮酸(5.0mg/支)和1支吖啶黄素(3.0mg/支)
2. 在无菌条件下分装试管,每支试管10ml。
3. 制备质控菌液。
4. 目标菌的接种。
接种10CFU~100CFU的单核细胞增生李斯特氏菌,接种体积不超过1mL,同时接种两个平行管,混匀。将相同体积的目标菌菌悬液(与试管接种同一稀释 度) 倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板) ,接种两个平板,作接种量计数用 。30℃需氧培养24h。
5. 非目标菌的接种
接种1000CFU~5000 CFU的大肠埃希氏菌、粪肠球菌 ,接种体积不超过1mL,同时接种两个平行管,混匀。同时将1mL菌悬液(比试管接种小10倍~100倍稀释度)倾注平板(或适宜 稀释度0.1mL 涂布平板),接种两个平板,作接种量计数用,30℃需氧培养24h。
6.培养液的接种
培养结束后,吸取10μL单核细胞增生李斯特氏菌培养液涂布至PALCAM琼脂,每管一个平板,置于36℃需氧培养48h。
吸取10μL大肠埃希氏菌/粪肠球菌培养液分别涂布于TSA平板,每管一个平板,置于36℃需氧培养24h。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株,30℃需氧培养24小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
测试结果 |
质控评价标准 |
单核细胞增生李斯特氏菌 |
ATCC 19115 |
10-100 |
在PALCAM平板上菌落数多不可计;菌落呈灰绿色,中心凹陷黑色,周围有黑色 |
在PALCAM上>10CFU 灰色至黑色菌落,带有黑色晕环 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
1000-5000 |
在TSA平板上菌落数为0/0 |
在TSA上<100CFU |
粪肠球菌 |
ATCC 29212 |
1000-5000 |
在TSA平板上菌落数为0/0 |
在TSA上<100CFU |
图1-1 李氏增菌肉汤LB1培养基微生物质控结果
备注:a:单核细胞增生李斯特氏菌,b:大肠埃希氏菌,c:粪肠球菌
图1-2 10μL单核细胞增生李斯特氏菌培养液涂布至PALCAM琼脂
五、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。
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