一、培养基用途:
用于蜡样芽孢杆菌选择性増菌培养。
二、培养基成分:
成分 |
含量(g/L) |
胰酪胨 |
17.0 |
植物胨 |
3.0 |
氯化钠 |
5.0 |
磷酸氢二钾 |
2.5 |
葡萄糖 |
2.5 |
pH 7.3±0.1 25℃ |
三、原理:
胰酪胨、植物胨提供氮源,维生素和生长因子;葡萄糖提供碳源;磷酸二氢钾为缓冲剂;氯化钠维持渗透压,添加的抗生素多粘菌素B(2.25万单位)主要可抑制革兰氏阴性菌的生长。
四、操作方法
1、称取本品30.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装至每瓶225ml,121℃高压灭菌15min,冷却至50℃左右时,添加1支多粘菌素B(2.25万单位),摇晃均匀后,分装试管。
2、制备工作菌悬液。
3、接种。
目标菌(蜡样芽孢杆菌CMCC(B) 63303):接种10CFU-100CFU/管,接种体积不超过1mL,接种两个平型管。同时将1mL菌悬液(与试管同一稀释度)倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板)接种两个平板,做接种量计数用。
非目标菌(大肠埃希氏菌ATCC 25922):接种1000CFU-5000CFU/管,接种体积不超过1mL,接种两个平型管。同时将1mL菌悬液(比待测培养基试管接种小10-100倍稀释度)倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板)接种两个平板,做接种量计数用。
接种后30±1℃培养24±2小时。
图一: 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础30℃培养24小时后
30±1℃培养24±2小时后转接平板。
目标菌(蜡样芽孢杆菌CMCC(B) 63303):吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到MYP平板。
非目标菌(大肠埃希氏菌ATCC 25922):吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到非选择性平板上(如:TSA)。
4、将转接后的平板置于30±1℃培养24-48小时。
图二:试管转接平板后试验现象
五、实验结果
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
质量评定标准 |
特征性反应 |
蜡样芽孢杆菌 |
CMCC(B) 63303 |
10-100 |
在MYP上>10CFU |
菌落为微粉红色,周围有淡粉红色沉淀环 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
1000-5000 |
在TSA上<100CFU |
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