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胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础原理及实验现象

卢悦
录入时间:2024-10-22 16:42:52 来源:青岛海博生物

一、培养基用途:

  用于蜡样芽孢杆菌选择性増菌培养。


二、培养基成分:

成分

含量(g/L)

胰酪胨

17.0

植物胨

3.0

氯化钠

5.0

磷酸氢二钾

2.5

葡萄糖

2.5

pH 7.3±0.1 25℃


三、原理:

  胰酪胨、植物胨提供氮源,维生素和生长因子;葡萄糖提供碳源;磷酸二氢钾为缓冲剂;氯化钠维持渗透压,添加的抗生素多粘菌素B(2.25万单位)主要可抑制革兰氏阴性菌的生长。


四、操作方法

  1、称取本品30.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装至每瓶225ml,121℃高压灭菌15min,冷却至50℃左右时,添加1支多粘菌素B(2.25万单位),摇晃均匀后,分装试管。

  2、制备工作菌悬液。

  3、接种。

  目标菌(蜡样芽孢杆菌CMCC(B) 63303):接种10CFU-100CFU/管,接种体积不超过1mL,接种两个平型管。同时将1mL菌悬液(与试管同一稀释度)倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板)接种两个平板,做接种量计数用。

  非目标菌(大肠埃希氏菌ATCC 25922):接种1000CFU-5000CFU/管,接种体积不超过1mL,接种两个平型管。同时将1mL菌悬液(比待测培养基试管接种小10-100倍稀释度)倾注平板(或适宜稀释度0.1mL涂布平板)接种两个平板,做接种量计数用。

  接种后30±1℃培养24±2小时。

图一: 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础30℃培养24小时后

  30±1℃培养24±2小时后转接平板。

  目标菌(蜡样芽孢杆菌CMCC(B) 63303):吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到MYP平板。

  非目标菌(大肠埃希氏菌ATCC 25922):吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到非选择性平板上(如:TSA)。

  4、将转接后的平板置于30±1℃培养24-48小时。

图二:试管转接平板后试验现象


五、实验结果

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

质量评定标准

特征性反应

蜡样芽孢杆菌

CMCC(B) 63303

10-100

在MYP上>10CFU

菌落为微粉红色,周围有淡粉红色沉淀环

大肠埃希氏菌

ATCC 25922

1000-5000

在TSA上<100CFU

/


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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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