一、常见的细胞平衡盐溶液
平衡盐溶液(Balanced salt solution, BSS)是细胞学实验中必不可少的试剂,常用于哺乳动物细胞在体外环境时的短期维持,也可用作细胞冲洗液。BSS通常是无机盐的组合或混合物,成分主要包括钠、磷酸钠、钾、钙、镁和氯化物等。钾和钠调节渗透性和张力,而钙和镁可以保持细胞膜和内部结构的完整性,通过添加磷酸盐和碳酸氢盐,平衡盐溶液还能平衡环境pH的波动。有些BSS还会添加葡萄糖,为细胞提供能量。
细胞培养的平衡盐溶液包括:PB磷酸缓冲液(Phosphate buffer solution,PB)、PBS磷酸缓冲盐溶液(Phosphate-buffered saline, PBS)、杜氏磷酸缓冲盐溶液(Dulbecco's phosphate-buffered saline, DPBS)、Hank's平衡盐溶液(Hank's balanced salt solution, HBSS)、Earle's平衡盐溶液(Earle's balanced salt solution, EBSS)和格氏平衡盐溶液(Geys balanced salt solution, GBSS)等。
PB缓冲液通常由磷酸二氢钠(NaH2PO4)和磷酸氢二钠(Na2HPO4)配制而成,另外也有使用磷酸钾盐配制(即K2HPO4或KH2PO4),其配制方法和缓冲液能力与磷酸钠缓冲液相同。PB缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛,可配制各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液,通常在pH为5.7-8.0之间使用。PB缓冲溶液在化学反应、合成反应等化学领域中有广泛应用,在部分抗体制剂中也有应用,但如果用其冲洗细胞,则可能会导致细胞低渗吸水,甚至胀破。
PBS缓冲液具有与PB缓冲液相同的缓冲对:H2PO4-和HPO42-,与PB缓冲液不同的是PBS添加了氯化钠和氯化钾来增加盐离子浓度。PBS缓冲液通常在pH为7.2-7.4使用,具有盐平衡、调节渗透压和一定的pH缓冲作用。DPBS是生物学、生物化学研究中使用较广泛的一种平衡盐溶液,DPBS和PBS的成分相同,但DPBS的Na2HPO4与KH2PO4的添加量略小。另外一部分文献将该PBS缓冲液写成D-PBS缓冲液,并强调是不含钙、镁离子的配方。DPBS主要用于胚胎学方面的研究,可作为胚胎、组织、细胞的漂洗液、冻存液和培养液。可根据需要在D-PBS中加入葡萄糖、丙酮酸钠等,以维持培养物的基本营养。
Hank's平衡盐溶液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液,主要成分为NaCl,KCl,KH2PO4,Na2HPO4,NaHCO4和葡萄糖,具有维持渗透压、保持pH稳定、提供简单营养等作用。HBSS可用于多种细胞培养应用,如漂洗组织块、器官或细胞,运输细胞或组织,稀释细胞计数,以及配置其他试剂等。从成分上来说,Hank's缓冲液与D-Hank's缓冲液的一个主要区别在于D-Hank's缓冲液不含有钙离子和镁离子,原因在于钙离子、镁离子会抑制胰蛋白酶活性,因此不含钙离子、镁离子的Hank's平衡盐溶液(D-Hank's)还可用于细胞解离前清洗以及配制胰蛋白酶消化液。与PBS和DPBS相比,Hank's缓冲液更复杂,Hank's溶液中磷酸盐含量要低一些,因为该溶液添加的碳酸氢钠可以起到pH调节的作用,此外,该缓冲液还添加了葡萄糖,可为细胞提供简单的营养。
Earle's平衡盐溶液,是细胞分离或培养中常用的磷酸盐缓冲液之一。EBSS专为CO2环境中的细胞短期维持而设计,主要成分为葡萄糖,NaHCO3,NaCl,KCl和Na2HPO4,具有维持渗透压、保持pH稳定、提供简单营养等作用,可用于体外实验中组织块、器官或细胞的漂洗、细胞或组织的运输、细胞培养用试剂的配制以及作为细胞计数的稀释液,也可用于诱导细胞自噬等领域。HBSS和EBSS两者都是多数培养基的基础溶液,主要区别是缓冲能力不同。HBSS的NaHCO3含量较低(0.35克/升),其缓冲能力较弱,一般用空气平衡,即利用空气中的CO2使溶液pH值平衡。EBSS含有高浓度的NaHCO3(2.2克/升),其缓冲能力较强,溶液pH值需在5%的CO2培养箱中才能达到平衡。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用EBSS。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,选择HBSS液即可。
此外,EBSS和HBSS都可以选择含或不含钙镁离子及酚红的溶液,使用时应根据实验的需要进行选择。酚红的添加主要是指示溶液的酸碱度变化,但由于酚红会干扰流式细胞检测,一般在做流式细胞检测时,使用无酚红产品。钙镁离子会抑制胰蛋白酶的活性,故含有钙镁离子的缓冲液通常用作运送介质、试剂的制备;不含钙镁离子的缓冲液,通常用于细胞清洗。值得注意的是含有葡萄糖和碳酸氢钠(NaHCO3)的溶液不能进行高压灭菌,如果是自行配制,应选择过滤除菌,如果是直接订购产品,要注意进行无菌分装。
二、产品展示
青岛高科技工业园海博生物技术有限公司生产的PBS和DPBS缓冲液产品,均采用过滤除菌工艺,在百级洁净室中进行无菌灌装,每批产品均已通过无菌测试,并且经过严格的质量控制测试,确保产品性能和批次间一致性,亦进行了pH、渗透压、内毒素等测试,非常适合在细胞培养中使用。
我公司生产的的PBS和DPBS缓冲液产品如图1,内毒素含量不超过0.01EU/mL,检测结果如图2,详情请参考:PBS和DPBS缓冲液产品。
图1 商品化的PBS和DPBS缓冲液
图2 内毒素检测结果
1~5:浓度分别为0EU/mL、0.01EU/mL、0.025EU/mL、0.05EU/mL和0.1EU/mL的内毒素标准液检测结果;6:我公司生产的PBS产品内毒素检测结果。
产品货号 |
产品名称 |
产品说明及用途 |
用于细胞的洗脱液 |
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用于细胞的洗脱液,不含钙、镁离子 |
相关产品:
磷酸盐缓冲液PBS(pH7.2)(细胞缓冲液)-点击查看产品详情
Dulbecco's磷酸盐缓冲液(DPBS)(不含氯化钙和氯化镁)-点击查看产品详情
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