聚乙二醇

【原理】

  聚乙二醇(Polyethylene Glycol,简称 PEG)是融合剂,在它作用下,可使两个细胞的突起间发生细胞膜融合，30分钟后可见有2个或多个核的细胞，其使细胞融合的机理尚不完全清楚,有人认为PEG使细胞膜的脂类分子的物理结构重排,容易打开细胞膜,使细胞融合。PEG的分子量由500~6000,浓度从40%~60%均可使细胞融合，但融合效果不同。分子量太低,效果不佳;分子量太高,粘度大,不易操作。当PEG分子量为1000、浓度为50%时，融合率较高。

【成分】

【制法】

  50%(W/V)PEG配制:称取PEG1g，放入玻璃刻度离心管，115℃灭菌15分钟，冷至50℃左右加入预热(37℃)无牛血清的RPMI-1640 0.8ml,用NaHCO₃，调整至pH7.0左右。用RPMI-1640补足至总体积2ml。另一种配制方法是以GKN代替RPM-1640,将所选PEG与等体积GKN混合，沸水中加温30分钟或115℃灭菌15分钟，其PH调节要根据酚红颜色,或在灭菌通风橱内开口放置一段时间或通入5%CO₂。

【用途】

  促进细胞融合的作用。

【注意事项】

  1.不同牌号PEG,即使分子量相同,融合率也有明显的差异。

  2.要选用高纯度的、供气相层析用的PEG

  3.PEG作用时的温度,一般采用室温或37℃。

  4.PEG作用时,一般采用pH7.0左右,有人主张不调整pH,有人认为可调整至pH7.6~7.8,甚至到pH8.0~8.2。

  5.PEG作用的时间,一般主张2~3分钟,过短效果不佳,过长毒性大。

  6.如果加入5%二甲亚砜(DMSO)到PEG，可防止PEG加入过快而造成渗透压过大的变化。

上一篇：8-氮鸟嘌呤

下一篇：HAT培养基