HAT培养基

录入时间:2024-11-5 16:36:10 来源：现代微生物培养基和试剂手册

【原理】

细胞合成DNA有两条途径,一条是从头合成途径(denove),另一条是应急途径(salvage)。在从头合成这条主要途径被HAT培养液中的叶酸拮抗物A阻断时,即可借应急通路,利用HAT培养液中的H和T合成DNA。但是，用于融合的小鼠骨髓瘤细胞,已经用过嘌呤类似物8-氮鸟嘌呤或6-巯基鸟嘌呤筛选,均已成为缺乏应急通路所需的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRTase)或胸腺嘧啶核苷激酶(TKase)的缺陷型,以致未融合的骨髓瘤细胞或自身融合物,终因无法利用H或T合成DNA而死亡;而脾细胞及其自身融合物,虽有HGPRT酶,却缺乏于组织培养条件下增殖的能力,一般于2周内自然死亡。唯独脾细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞,分别由二亲代细胞获得了应急通路所必须的-HGPRT酶或TK酶和在组织培养条件下生长的能力,而得以在HAT培养液中增殖,最终被选出来。

【成分】

RPMI-1640完全培养基	100ml
HT贮存液	1ml
A贮存液	0.7ml

【制法】

同HT培养基,再添加0.7mIA贮存液。

【用途】

筛选杂交瘤细胞。

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