动物血清

【原理】

  动物血清是组织培养中用量最大的天然培养基。血清中含有丰富的营养物质,包括大分子的蛋白质和核酸等。血清的种类很多,其中有小牛血清、胎牛血清、马血清、人胎盘血清等。胎牛血清比较理想,但不易得到,目前采用较多的是小牛血清,国内已有小牛血清出售。

【成分】

  血清、生理盐水。

【制法】

  (1) 将取血瓶和取血玻璃插管用的乳胶管连接再采血。所有器械都要包装并高压蒸汽灭菌；

  (2) 小牛(出生1周岁的)侧卧在周定台上，用绳拥牢,剪去颈部毛,用碘酒和酒精消毒；

  (3) 沿气管中线切开皮肤,小心剥离组织，分离出动脉,用止血谢夹住近心端。后夹住远心端，中间相距5~7cm，从血管下方穿过两根线；

  (4) 酒精消毒颈动脉,于远心三分之二处用眼科剪横切一小口(勿将动脉剪断)；

  (5) 把取血插管从切口插入动脉(向近心端)，用小绳牢固扎住插管头；

  (6) 打开近心端止血钳,让血自然流入血瓶内,每头小牛可取血1500~2000ml；

  (7) 取血瓶倾斜放置2~4小时(室温)，待血液充分凝固,移入4℃冰箱过夜,让血清析出；

  (8) 次日吸取上清,以4000rpm,离心30分钟,收集血清；

  (9) 血清用蔡氏滤菌器过滤除菌,分装,细菌培养检查无菌后,置低温(-20℃)冰箱保存。

【用途】

  促进细胞生长,促进细胞贴壁,保护细胞,解除脂肪酸、胰酶及金属离子等的毒性作用,使细胞不受伤害。

【注意事项】

  1.取血瓶应预放30ml生理盐水,以便于血凝块和瓶壁分离。

  2.放血时不宜太快,以防止溶血。少量溶血的血清仍可用。

  3.不能用碘酒消毒颈动脉,以防酒精混入血清内。

  4.无菌检查可采用肉汤琼脂培养基。必要时要进行支原体(PPLO)检查。

  5.血清使用前需经56℃水浴内放置30分钟灭活,以消除补体活性。

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