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【原理】
醋酸纤维膜是由醋酸纤维素制成的均一薄膜，对分子移动无阻力,是免疫球蛋白鉴定的一种简单快速的电泳方法。血清蛋白在一定的pH下都带有电荷,由于各种蛋白质的等电点及分子量的不同,所带的电荷也就各不相同,在直流电场的作用下,它们在醋酸纤维膜上泳动的速度也不一样,经过一段时间泳动后,即可彼此分开,形成电泳图谱。
(一)巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度(μ)0.05)
【成分】
5.5二乙基巴比妥钠
10.3g
5.5二乙基巴比妥酸
1.84g
蒸馏水
1000ml
【制法】
将以上两种成分加入蒸馏水中,加热溶解即可，
【用途】
蛋白电泳用。
(二)染色液
1.0.05%氨基黑染液
【成分】
氨基黑10B
0.5g
1mol 醋酸
500ml
0.1mol 酸酷钠
500ml
【制法】
先将醋酸和醋酸钠溶液混匀后,再加入氨基黑粉剂,待充分混匀溶解后,即可使用。
2.0.25%氨基黑染液
【成分】
氨基黑10B
1.0g
甲醇
200ml
冰醋酸
40ml
蒸馏水
160ml
【制法】
先将后3种成分混匀,然后再加入氨基黑混匀溶解后,即可使用。
【用途】
用于经电泳后之醋酸纤维膜标本的染色。
(三)5%醋酸脱色液
【成分】
甲醇
90ml
醋酸
10ml
蒸馏水
100ml
【制法】
把以上3种成分混合摇匀后,即可使用。
【用途】
用于经染色后之醋酸纤维膜电泳标本的脱色。
(四)透明液
【成分】
95%乙醇
7份
冰醋酸
3份
【制法】
将以上两种成分混匀后,即可使用。
【用途】
用于“染过色的醋酸纤维膜电泳标本”的透明。
(五)蛋白洗脱液
【成分】
1N 氢氧化钠
500ml
0.1N EDTA
50ml
蒸馏水
500ml
【制法】
将以上3种成分混匀后即可使用。
【用途】
用于洗脱醋酸纤维膜的蛋白带。
注:此液用于洗脱氨基黑染色的蛋白带,而丽春红R或S染的蛋白带则用0.4NNaOH 溶液。
(第二军医大学蔡燕刚、吴挹芳编 吴挹芳审)
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