《中国药典》中质控菌株的管理解析

  ——《中国药典》2020版第四部，9203药品微生物实验室质量管理指导原则：菌种

一、菌株的来源和复苏

  “药品微生物检验用的试验菌应为有明确来源的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生菌株。

  标准菌株应来自认可的国内或国外菌种保藏机构，其复苏、复壮或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行。”

  在中国药典中，质控菌株大多数使用CMCC中国医学微生物菌种保藏中心来源的标准菌株，购买后按照使用说明书进行复苏和保存，做为标准储备菌株。从其他的商业机构也可买到对应编号的菌株，是由商家自行传代制作，只能做为储备菌株或工作菌株使用。在初次进行菌株复苏时，应仔细阅读说明书，选择适宜的培养基，接种后放置于适宜的温度和气体条件下进行培养（多数细菌可以使用TSB/TSA在30-35℃培养，厌氧菌可使用硫乙醇酸盐流体培养基、血平皿之类的在30-35℃进行厌氧培养，真菌可以使用SDA/SDB在20-25℃培养3-5天）。

二、菌株的确认和保存

  复苏后的菌株应进行纯度和特性的确认，可通过菌落形态观察是否有污染现象，通过革兰氏染色可初步确认复苏的菌株是否有问题，通过生化鉴定或其他手段对菌株的特性进行记录，确认复苏的菌株正确无误，采用适宜的方法保存菌株。

  对于大多数实验室，建议使用-70℃以下的超低温冰箱长期保存标准储备菌株，使用-30℃以下保存储备菌株（温度越低越好），可采用甘油冻存、瓷珠冻存、脱脂牛奶冻存等方法，也可使用冻干粉、载体保存等方法（需要特定设备，一般实验室可能不具备）。

  冷冻的菌株一旦解冻转种，不能再次冷冻和使用。

  注：菌株特性确认可能需要数天时间，而菌株的保存宜使用新鲜的菌株，因此菌株的鉴定和保存可以同时进行。

三、菌株的传代

  直接从菌种保藏中心获得的菌株，一般可认为是零代菌株（有说明的除外），复活后为第一代菌株，每一次的转接或活化培养都是一次传代，工作菌株使用一般不能超过5代。使用过程发现菌株出现老化、变异、污染等问题时应停止使用并及时销毁。

  菌种需做定期传代，特别是采用斜面冷藏等方式时，菌种保存时间较短，需及时转接传代。而采用超低温冷藏保存的菌株，可以大大延长保存时间数年甚至数十年，不需要频繁传代，但需要定期做菌种确认（即纯度和特性检验，确保菌株正确，且没有变异老化等现象出现）。

四、菌株的销毁

    出现老化变异等现象的菌株、使用后的菌株、检验后带菌的样品等，需采用有效手段进行杀灭销毁（如高压蒸汽灭菌），防止存活的菌株传播到周围的环境中。

五、菌种信息管理

    实验室应建立完整的菌种文件和记录。内容包括菌株的申购、进出、收集、贮藏、确认、转种、使用以及销毁等全过程，每支菌种都应注明其名称、标准号、接种日期、传代数，并记录菌种生长的培养基和培养条件、菌种保藏的位置和条件等信息。通常实验室应有台账（记录菌种接收相关信息）、菌株保存记录、菌株活化/传代记录、菌种确认记录（记录活化、菌株形态、生化鉴定等信息）、菌种使用记录、菌株销毁记录等。

参考文献：

《中国药典》2020版第四部，9203药品微生物实验室质量管理指导原则：菌种。

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