常见问题答疑（细菌的接种）

  本文挑选了部分客户咨询较多、反馈较多的问题以问答的形式进行答疑。

  常见问题一

  Q:为什么中国药典要求接不大于100CFU的菌，在GB4789.28中对培养基的接种量也有要求？

  A：在中国药典中的液体培养基和国标部分使用到液体的培养基的检验中，都要求接种量不大于100CFU（国标一般为10-100CFU）。一方面是可以检验该培养基灵敏度，若接种量为10CFU即可检出目标菌，则检样中有1000CFU，10000CFU目标菌时，可以保证其被检出。而若接种量1000CFU时才可检出目标菌，那么检样中若有10CFU或100CFU目标菌时，能否检出呢？这样很可能造成检样出现假阴性。另一方面，当液体培养基接种量过大时，细菌生长过快，聚集效应也较为明显，很多反应不典型，也不利于检验人员通过培养基的产气、变色等现象进行初步判断。

  而在固体培养基上，接种菌量较多时，则会容易造成菌落之间成片生长，贴壁生长，造成菌落状态不典型，难以计数等问题。

  常见问题二

  Q：请问依据上一个问题的考虑，是否接种量越小越好呢？

  A：并不是越小越好。当接菌量过少（如只有个位数的CFU菌量时），平行实验的准确性会降低，因为菌很可能在液体中因菌体受损、衰老等原因在大量分裂之前就死亡。如果做了10个平行实验，很可能会出现2-3根生长，其余皆不生长的情况。而对于固体培养基来说，接菌量太少，对回收率计算时的影响很大，很可能菌落数量绝对值相差一两个，回收率差了百分之十乃至更多，显然是不合适的。

  常见问题三

  Q：如何确定自己到底接了多少菌进培养基？当需要接高浓度菌时，我应该如何确定浓度？按照麦氏比浊的方式稀释了菌最后计数却相差较大，大概是什么原因？
  A：在接菌时，可以同时接种TSA培养基（真菌一般接种SDA培养基，部分细菌或真菌需要接种一些特殊的培养基）同条件进行培养，最后计数TSA培养基上的菌落数，即可算出我们接了多少CFU的菌进入培养基。

  当做定性试验时，很多客户不太确定什么样的浓度才是1*10⁸CFU,若确实相关经验较少，此处推荐吸取菌液进行梯度稀释后，选择合适梯度进行涂布计数，最后反推菌液浓度是否合适。若标准注明了麦氏比浊度，也可根据浊度进行参比。

  但是麦氏比浊也并不是非常稳定的方式，同样受到菌的种类、活性的影响，因此应尽量采用新鲜的工作菌株进行操作。

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