β-半乳糖苷酶试验培养基和试剂

【原理】

  某些细菌具有半乳糖苷酶,亦可水解邻硝基酚β-D-半乳糖苷(简称ONPG),而释放出黄色的邻硝基酚。根据在单位时间内有无黄色反应,以判定有无p半乳糖苷酚。

【成分】

  试剂

  (1)0.01molpH7.0磷酸钠缓冲液50ml

  (2)邻硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)液20ml

  培养基

  10g/L乳糖肉汤琼脂1000ml

【制法】

  (1)将6.9g磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)溶于45ml蒸馏水中,用30%的氢氧化钠调整至pH7.0,再加蒸馏水至50ml,置4℃冰箱备用。用前如有结晶可加温溶解;

  (2)称取ONPG80mg,溶于15ml蒸馏水中,再加0.01molpH7.0磷酸钠缓冲液5ml。调整至pH7.0即为ONPG 液,贮于暗色的瓶中,置4℃冰箱备用;

  (3)在1000ml肉汤琼脂中,加10g乳糖,即为10g/L乳糖肉汤琼脂。

【用途】

  用于鉴别肠杆菌及迟缓发酵乳糖的肠杆菌。

【注意事项】

  ONPG溶液不稳定,久置若呈现黄色,应废弃不用。必须是无色的才可用。

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