微生物鉴别方法—新技术新方法—分子生物学方法1

   
   （1）DNA碱基比 
    DNA碱基比［（G+C）mol %］，以G+C物质的量分数（mol %）表示： 
        （G+C）mol %=（G+C）/（A+T+G+C）%
    该比值的变化范围很大，原核生物变化范围是20—78%，真核生物的变化范围为30%—60%。 
    目前已经测定了大量生物的DNA碱基组成，从中可以发现一些带有规律性的结论：①亲缘关系密切而表型又高度相似的微生物应该具有相似的DNA碱基比；不同微生物之间的 DNA碱基比差别很大，则表明它们之间亲缘关系疏远。②DNA 碱基比相同或相似的微生物并不一定表明它们之间的亲缘关系就一定相近，这是因为DNA碱基比只是指DNA中4种碱基的含量，并未反映出碱基在DNA分子中的排列顺序。③一般认为，DNA碱基比相差超过5%就不可能是属于同一个种，DNA碱基比相差超过10%可考虑是不同属。 
   DNA碱基比可用化学方法或物理方法测定。由于化学方法比较费时，而且误差也较大，因此目前比较常用物理方法进行测定，尤其是热变性温度法。该法操作比较简便，重复性较稳定，常被作为首选而采用。该法是用紫外分光光度计测定DNA的熔解温度（Tm）。它的基本原理是：首先将DNA溶于一定离子强度的溶液中，然后加热。当温度升到一定的数值时，两条核苷酸单链之间的氢键开始逐渐被打开（DNA开始变性）分离，从而使DNA溶液365紫外吸收明显增加；当温度高达一定值时，DNA完全分离成单链，此后继续升温，DNA溶液的紫外吸收也不再增加。DNA的热变性过程（即增色效应的出现）是在一个狭窄的温度范围内发生的，紫外吸收增加的中点值所对应的温度称为该DNA的热变性温度或熔解温度。在DNA     分子中，GC碱基对之间有3个氢键，而AT碱基对只有2个氢键。因此，若细菌的DNA分子G+C含量高，其双链的结合就比较牢固，使其分离成单链则需较高的温度。在一定离子浓度和一定pH的盐溶液中，DNA的Tm值与DNA的G+C含量成正比。因此，只要用紫外分光光度计测出一种DNA分子的Tm值，就可以计算出该DNA的G+C含量。 

 

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