细菌染色标本检查法—抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法1

   
   （1）实验材料 
①染色液。石炭酸复红液、碱性美蓝溶液、3%盐酸酒精。 
②菌种。含结核分枝杆菌的痰标本。 
③其他。普通玻片、酒精灯、接种环及显微镜等。 
（2）实验方法 
①涂片 
a、直接涂片和厚膜涂片。用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液，制成10mm*10mm大小的均匀薄涂片，或取上述标本约0.1ml，制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。自然干燥，火焰固定后，行抗酸染色或金胺“0”荧光染色，镜检。 
b、集菌涂片。І、沉淀集菌法。取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混匀。经103.43Pa高压灭菌20—25min（或煮30min），3000r/min离心30min，弃上清液，取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”荧光染色镜检；П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶内，加1—2倍量40g/lNaOH溶液，经103.43Pa高压灭菌20—25min（或煮30min）。冷却后滴加汽油0.3ml，瓶口盖玻璃纸加塞，塞紧瓶口，置振荡器或手摇振荡10min，再加蒸馏水至满瓶口而又不外溢，静置10—15min，将已编号的洁净载玻片盖在瓶口上，静置15—20min，取下载玻片并迅速将载玻片翻转至浸膜向上，或用接种环取瓶口液面物涂于载玻片上，自然干燥，火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”荧光染色，镜检。 
②染色 
a、初染，在已固定的结核分枝杆菌痰标本涂片上放一小块滤纸片，之后滴加数滴石炭酸复红液后，将标本片放在火焰高处徐徐加温，当涂片上液体出现蒸汽时离开火焰（切不可煮沸），待玻片稍冷却后补充染液（以防干燥或玻片断裂 ），如此维持染色3—5min，待玻片冷却后用水冲洗，甩干。 
b、脱色，在涂片上滴加数滴3%盐酸酒精，轻轻晃动玻片，直至无红色液体流下为止，一般作用1—3min，水洗，甩干。 
c、复染，滴加数滴碱性美蓝液于涂片上，作用1min后，水洗，甩干。用吸水纸印干标本片或 自然干燥后油镜检查。

 

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