①病毒液要低温冻结保存（冻干保存更好）。小量分装，以免反复冻融影响效价。
②在固定病毒稀释血清的试验中，选用病毒的数量与敏感性关系很大。如病毒量过多敏感性差，保存过程中毒力不断下降，为确保毒力的稳定可在实验前传代两次，如滴度在10（-7），可将原液稀释成10（-6），为100TCID50。冻干保存不需传代。
③各种病毒感染机体后，血清抗体出现的时间不同。抗体一旦出现就随病程的发展而增长，并保持一定水平，维持一定时间。因此要求取发病急性期和恢复期双份血清，以比较其中和指数。
④血清中存在一些非特异性的能增强抗病毒抗体中和作用的物质和灭活病毒的物质，如补体、备解素、干扰素等。这些物质可用加温的方法破坏。
⑤必须严格要求血清无菌。否则在试验中可引起动物、鸡胚、细胞的非特异性病变及死亡，影响试验结果。
⑥用感染动物的方法做中和试验，要选择同一品种、健康无潜在疾病的同批敏感动物，并要求大小均匀和一定体重，选择敏感的接种途径；用鸡胚做试验材料，要选择发育良好、适宜胚龄的鸡胚，选择敏感的接种途径；用培养细胞单层作中和试验，要选用没老化的敏感单层细胞，并根据不同病毒的要求，确定培养温度。
2、临床意义
①测定血清中抗体的滴度，诊断病毒性疾病；观察人群的免疫水平；注射疫苗后的抗体反应，从而检测疫苗的效果。
②中和试验具有很高的特异性，可用已知型别的免疫血清或抗原鉴别病毒的型别，进而分析病毒的抗原性。
③用动物制备免疫血清时，可用中和试验的方法测定免疫血清的效价。
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