中和试验—实验方法

   病毒中和试验有两种方法：固定血清一稀释病毒法和固定病毒一稀释血清法。固定血清一稀释病毒法应用较普遍 。 
（1）固定血清一稀释病毒法将等量血清与不同稀释度的病毒相结合，相互作用后接种小白鼠，结果以中和指数表示。 
①⑥病毒滴度LD50（半数致死量 ）、EID50（半数鸡胚感染量 ）、TCID50（半数组织培养感染量）测定。 
②先将病毒制成0.2病毒悬液，然后作一系列10倍递次稀释，使之成为0.02，0.002，......。中和试验选择的病毒稀释度范围，要根据病毒滴定的结果而定。 
③将选定的稀释度病毒分别定量加入两排无菌试管内。一排每管加入与病毒等量的免疫（或被检）血清作为试验组，另一排每管加入与免疫（或被检 ）血清同样的正常血清作为对照组。充分摇匀后置37℃水浴作用1h。 
④按“病毒滴度测定”的方法接种实验动物（鸡胚或组织培养）。以同样方法计算试验组及对照组的LD50（EID50或TCID50）。 
⑤结果计算。对照组LD50（EID50或TCID50）减去试验组LD50（EID50或TCID50）后差数的反对数，为陂检标本的中和指数。中和指数小于10为阴性，10—50为可疑，大于50为阳性。 
（2）固定病毒-稀释血清法：将定量的病毒与不同稀释度的血清相结合，作用后接种动物、鸡胚或细胞管，以测定血清中中和抗体的效价。 
①④⑤病毒滴度LD50、EID50、TCID50测定。  
②将试验血清做系列倍比稀释，使之成1：2，1;4，1:8……。 
③将病毒稀释成每只动物（鸡胚或细胞管）1/2接种量中含100 LD50（EID50或TCID50），计算病毒稀释倍数的方法为（以TCID50为例）： 
a=lg（TCID50/0.2ml）—lg（中和试验时1/2病毒接种量）—lg（每管接种量/每管接种病毒量） 
    上式计算结果的反对数，10（a）即为病毒应稀释的倍数。 
    例如，某病毒lg（TCID50/0.2ml）=6.5，中和试验时1/2接种量（即0.1ml）中含100 LD50，则a=6.5—lg100—lg2=4.2，而10（4.2）=15849，即为病毒应稀释的倍数。 
④不同稀释度血清与等量病毒相加，摇匀放37℃水浴作用1h，接种动物（鸡胚或细胞管）。 
⑤结果计算。固定病毒一稀释血清法中和试验的结果计算，是计算出保护50%动物不死亡的血清稀释度。   
   
   

 

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