组织培养技术—组织培养原理1

     将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养瓶中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称为组织培养。包括器官培养、组织块培养和细胞培养。 
1、组织来源 
   人、猴、啮齿类动物、禽的胚胎和脏器为组织培养常见的组织来源，对于虫媒病毒可使用蚊组织，手术切除的癌瘤组织可用于建立传代细胞。组织要保持新鲜，一般须在6h内处理。 
2、单细胞的制备 
   组织分散成单细胞的方法主要有3种：机械分散法、酶消化法、螯合剂分散法。后两种方法多与机械法结合使用。 
（1）机械分散法：适用于细胞间连接较松的组织，如鸡胚组织。可将鸡胚剪成1mm3的小块，放在底部有一块铜丝网的10—20ml注射器内，用手的压力将组织细胞挤过网孔。脾脏组织的分散可将脾组织放在无菌平皿中，用1ml注射器芯轻压，使细胞出来。 
（2）酶消化法：目前主要用胰酶，它能消化细胞间的蛋白质成分。组织块受胰蛋白酶作用后细胞变为圆形，再用吸管机械吹打或电动搅拌细胞可分散。胰蛋白酶用的浓度过大或时间过长对细胞均有损害，影响细胞的生长。一般用2.5—5g/l的胰酶，消化液量为消化物的5—10倍，37℃作用20—30min，大的组织块可作用60min，pH值范围一般在7.4—7.6。 
（3）螯合剂分散法：钙离子和镁离子是细胞结合的离子。单层细胞在缺少钙、镁离子的环境下，细胞变圆，分散为单细胞。乙二胺四乙酸容易与钙、镁螯合而使细胞间及细胞与玻璃培养瓶间的钙、镁离子螯合，而达到细胞分散的目的，但对于新鲜组织的分散效果不佳，故多用于单层细胞的分散。乙二胺四乙酸不受血清的抑制，所以，消化后需用Hanks液洗去残留乙二胺四乙酸，以免影响细胞生长。    
   
   

 

上一篇：组织培养技术—组织培养原理2

下一篇：鸡胚培养技术—接种与收获