真菌的一般检验法——不染色标本直接检验法

  真菌的一般检验法为直接镜检观察是否有菌丝、孢子或菌体，检出循环抗原等。直接镜检对真菌病诊断很重要，尤其对威胁生命的真菌病，快速、准确的非培养诊断法是非常必要的。 
 
    不染色标本直接镜检除部分深部感染真菌可初步确定菌种外，大部分浅部感染真菌仅能确定真菌菌丝和有无孢子，很难确定为何种真菌感染。 
1、材料 
①标本。甲屑、皮屑、毛发等固体标本；脓汁、尿沉渣、分泌物等液体标本。 
②试剂。100g/lNaOH或KOH溶液；生理盐水。 
③其他。小镊子、盖玻片、载玻片。 
方法 
（1）制片方法将甲屑、皮屑、毛发等 固体标本置灭菌洁净载玻片上，加一滴封固剂（100g/lNaOH或KOH溶液），盖上盖玻片，微加热使角质软化，轻压盖玻片，使标本变薄、透明，并驱除气泡。脓汁、尿沉渣、分泌物等标本仅用无菌生理盐水稀释即可。 
（2）检验方法：先用低倍显微镜检查，当查到可疑为真菌孢子或菌丝时，再换高倍镜检查，观察记录菌丝和孢子。许多标本不需染色即可直接镜检。如观察分生孢子的发育需放大1000倍。有些结构如分生孢子梗上产生的瓶梗需用相差显微镜才看得清楚。某些病原性真菌如荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌感染病人标本中，直接检出与这些病原菌形态特征符合的真菌时，结合临床表现容易作出明确诊断。如果检出的是正常菌群，要确定其病原性比较困难。在酸中毒的糖尿病病人暴发急性感染时，如检出宽或波形不分隔的菌丝则应考虑毛霉菌病。直接检出的结果也有助于实验室进一步诊断，有助于采取恰当的检验步骤和措施（如选择特殊的培养基和确定适宜的孵育时间）。但是，直接检查也有其局限性，因为阴性结果也不能排除真菌感染，直接检查不如培养法敏感，其敏感性也随标本类型、数量、采集时间和质量等而有不同；也有假阳性结果，溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新型隐球菌；脂肪微滴也可能与出芽酵母细胞混淆。出现可疑结果时应进行复查，或采用其他检验步骤。除花斑癣病原菌培养有困难只能依据直接镜检诊断外，一般标本应进一步作培养检查。

 

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