隐球菌的鉴定

1、材料 
（1）标本：脑脊液、痰、脓、尿、活体组织及人体解剖材料等。 
（2）试剂：墨汁、沙氏固体培养基、小白鼠。 
2、方法 
（1）标本采集：采集脑脊液、痰、脓、尿、活体组织及人体解剖材料等。 
（2）直接检查：将样品经墨汁染色后镜检，查看有无圆形或卵圆形的芽生孢子，孢子外面有一肥厚的荚膜，荚膜比菌体可大1—3倍。出芽可为单芽，也可为多芽，孢子内可见有一个较大反光颗粒（脂质颗粒）和许多小颗粒。 
（3）培养检查：将样品接种在沙氏固体培养基上，置25—37℃培养均可生长，24—48h形成酵母样菌落，少数菌株生长缓慢，至少要培养2—3周才能形成菌落，菌落呈不规则圆形。开始时为白色，透明发亮，表面光滑凸起，为酵母型菌落，日久菌落增厚，表面黏稠。颜色由乳 白、奶油色转为橘黄色。镜检可见有许多芽生细胞，有时也可见到芽管。 
（4）进一步鉴定可做以下试验：酚氧化酶试验、尿素酶试验、糖同化及发酵试验、PCR检测等。 
（5）鉴定有无致病性：把分离到的细菌制成悬液，给小白鼠腹腔注射（0.5ml/只 ）或脑内注射（0.02ml/l只），观察有无发病死亡的情况。有致病性的新型隐球菌一般于接种小鼠后2—3周内小鼠死亡。 
（6）血清学试验：脑脊液和血清可用于检测抗原或抗体，常用乳胶凝集试验。但在治疗收效后，抗原滴度可下降。抗体能凝集隐球菌的酵母细胞或表层上附着的抗原颗粒。   
   

 

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