1、材料
（1）培养基：培养支原体用培养基。
（2）器材及试剂：L玻棒、马血清、抑菌剂。
2、方法
（1）标本的采集;支原体常侵及人和动物的黏膜表面，可用灭菌棉拭子取分泌物接种于2—3ml支原体液体培养基的小管中。若标本是组织块，可在灭菌乳钵或玻璃匀浆器中研成乳浆后接种。取样后应尽快接种培养。
分离培养：接种固体培养基时转动拭子使标本液体尽量挤出，用无菌毛细吸管吸取标本1—2滴约0.2ml接种于平板固体培养基上，用L玻捧涂抹使液体标本分布均匀，放在5%—10%CO2环境中37℃培育，3—5d后观察结果。接种半固体培养基或液体培养基时，接种前半固体培养基在水浴中煮沸至完全融化后，待冷却至50℃左右加入马血清、抑菌剂等，摇动使均匀，并待培养基冷至37℃左右，用无菌吸管接种标本0.5ml于培养基中，摇匀后盖以灭菌胶塞，37℃培育，观察支原体菌落。液体培养基也如上接种。若有支原体生长，培养基即出现颜色变化。
（2）菌种的纯化：在平板固体培养基上用放大镜或低倍显微镜下可见“油煎蛋”状的典型支原体菌落，可用灭菌小刀切取菌落琼脂块，移入液体或半固体中压碎琼脂块进行培养，盖上胶塞，放37℃。待支原体生长、繁殖，培养基变红或变黄时，用液体培养基稀释培养物至10（-4），10（-5），取0.2—0.3ml接种于平板固体培养基上。如上处理，反复分离纯化2—3次，即可得支原体纯种，保存作鉴定试验之用。
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