支原体的扫描电镜检测

   
1、原理 
   利用电子显微镜的超级放大功能，可直接观察培养细胞中支原体污染情况。 
2、操怍方法 
 ①细胞传代至贴有盖玻片的平皿中；②培养24h取出；③PSB洗涤；④2.5%戊二醛/ PSB固定15min，PSB洗涤；⑤1%锇酸固定30min，PSB洗涤；⑥乙酸异戊酯脱水；⑦冰点干燥；⑧喷金；⑨扫描电镜观察，照相 
   综上所述，几种不同的方法各有特点，其应用也各有侧重。①支原体培养法是最为经济和可靠的方法，但其实验周期较长，所以常用于进行对怀疑细胞的最后甄别。②DNA染色法较为快捷，方法简单，但其灵敏度有一定欠缺，易造成漏检。③PCR检测支原体的方法最为快速、灵敏，取样量少，既可进行细胞检测也可进行细胞上清的检测，同时可以检测8种支原体的污染，是目前常用的检测手段。但其成本较高，条件要求严格，有时易出现假阳性。其弥补的方法是对怀疑的样品经过3次PCR检测，或用培养法检测。④电镜法非常直观、准确，但对使用环境要求高，操作复杂，实验周期较长，常作为样品的最后定性检测。  

 

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