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特异性核酸检测



录入时间:2008-11-24 16:49:34 来源:青岛海博生物

1、材料 
  “分子生物学诊断技术”。 
2、方法 
(1)DNA探针核酸杂交试验:根据沙眼衣原体染色体和质粒的DNA序列设计的DNA探针,以核酸杂交法检测沙眼衣原体,敏感性较高。采用非放射性核素标记技术后,已使用得相当普遍,但尚未估计出与非培养法相 比的优点。然而有一个突出优点,如与淋球菌的探针同时使用,则可同时检测同一标本中的衣原体和淋球菌两种病原体。 
(2)特异性DNA的扩增技术:通常有两种方法扩增衣原体的DNA,包括聚合酶链反应(PCR)和连接酶链反应(LCR)。 
①PCR。用于衣原体PCR引物有16SrRNA基因、7.5kb质粒及MOMP基因。 16SrRNA基因高度保守,适宜构建衣原体属特异性引物;7.5kb质粒及MOMP基因适于构建种或型特异性引物。 
   所有各种引物的PCR法,均比其他非培养法和细胞培养法敏感。扩增特异性的靶基因,有利于分子流行病学的研究,如MOMP基因可变区发生基因型变异。PCR也可用于治疗效果的判定,由于质粒DNA的被清除至少1周,当能检测出最小量DNA消失时,提示抗生素治疗后,发生持续感染的可能性将相对减少。 
②LCR。从1993年首先用于诊断衣原体感染以来,对男性和女性生殖道标本均有很高的敏感性,包括尿道、宫颈和晨尿标本。LCR已成为诊断衣原体的主要方法,在控制衣原体感染的计划中是一种很有效的广谱的筛选试验。在所有各种标本中。敏感性是90%—95%,特异性为99.5%。     

 

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