培养基的制备、融化程序的确认及注意事项——1

（一）培养基的制备 
    微生物实验室所用培养基可按药典规定检查方法中所列的培养基配方配制，也可使用复合型的干燥培养基，或是使用已配制且分装好的成品培养基。干燥培养基是将新鲜配制的液体培养基用不同的方法使水分去掉；或将培养基内的各种固形成分，经过适当的处理，充分混匀，使成干燥的粉末状。用时只要按比例加入一定量的蒸馏水，经过溶解、分装、高压蒸汽灭菌，即可应用。其优点是节省培养基配制时间，携带方便，使用简易，特别使用于一般流动性及设备简单的小型实验室。目前，国内外已有多家生产，如法国生物梅里埃公司、美国密理博公司的产品、中国药品生物制品所监制的产品，其制造方法有下列几种：喷雾法、真空法、烘干法、蒸发法、球磨法。 
    药品微生物限度检验、无菌检验、抗生素效价测定、药敏试验及其抗菌、防腐等项微生物检测中，培养基的质量好坏、稳定与否，对检验结果有极为重要的影响。但因培养基的配方中各原料成分的理化性能、稳定性不同，致使检验结果有较大差异，即使同一厂家生产的同一型号的原料产品，各个批号之间质量都有较大的差异，加上各地实验室配制培养基的方法不一，同一实验生长有显著不同。为此培养基的质量标准十分重要。干燥培养基，使用方便，节约人力、物力、时间，是培养基标准化的必由之路。按说明书要求称取适量后加水溶解配制，所用培养基质量必须符合药典规定的灵敏度检查试验及无菌性检查试验才可用于检验。     
配制培养基、缓冲液、试剂等时，称量要迅速以免吸潮而影响称量的准确性，同时为避免增加培养基等中的金属离子及其他微量化学元素而影响微生物的生长、鉴别、所用器具、容器应为洁净玻璃制品，所用溶解用水应为纯水或蒸馏水。加热溶解时不断搅拌促进培养基充分溶解，采用直火加热时易使培养基结底炭化而影响营养度和澄明度，可用沸水浴或隔套蒸锅通过蒸汽加热。然后调节pH，按规定的要求分装，容器封口后用经验证过的灭菌程序灭菌。灭菌程序的参数应记录于高压灭菌柜的使用日志及相应的配制记录中。注意灭菌后物品应有适当措施防止再次污染。制备某些选择性培养基或淋洗液需在使用前向培养基中加入β-内酰胺酶等试剂时，务必确保所加入剂的无菌性和质量保证。 
    制备好的培养基、缓冲液等应及时抽取适量用于检查pH、无菌性、灵敏度等质量是否符合规定。微生物检验用培养基、缓冲液及试剂的配制应有原始记录供追溯检查。所有相关信息包括：名称、处方原材料、称量数、稀释溶解量、灭菌条件、灭菌程序参数，制备日期、制备人签名、质量检查结果等，都必须在原始记录或工作日志上反映出来。 
（二）培养基融化程序的确认 
    装于试管瓶内的成品固体培养基，在使用前需将其融化。这一融化过程也同样需要确认，以保证培养基的营养成分不会因过度加热而受影响。 
    一般培养基应只能进行1次蒸汽灭菌处理，否则，重复高温加热会破坏培养基的营养成分。因此，不宜使用蒸汽灭菌柜融化琼脂培养基，宜选用沸水浴或微波炉融化培养基。因沸水浴的温度始终控制在100℃以内，相当安全，但对装量较大的培养基要使融化均匀充分，则加热的时间较长，微波炉融化培养基具有快速的优点。 
    至少选择3批具有代表性的不同类型培养基，对其融化前后的质量进行对比检查。确认时，应对不同融化法的运行参数（时间和温度）予以明确设定，确认合格后，将其写入相应的标准操作规程中。如果一台设备可以设定多个参数，建议在其最高和最低设定值下分别进行确认试验，以确定正常的使用范围。有关抗生素效价分析用培养基的融化过程确认方法，要参照有效期的确认试验方法进行。   
   

 

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