湿热灭菌法验证试验实例——验证原理

   USP对过热灭菌工艺的定义是指能使D值不小于1min的微生物至少下降12个对数单位的灭菌工艺。对一般的液体产品而言，在121℃灭菌15min即被认为过热灭菌工艺。但对管路、胶塞、织物以及过滤器等热穿透性较差的物品则需要更长的灭菌时间或更高的灭菌温度，方能达到过热灭菌要求。用作生物指示剂的微生物芽孢应具有良好的耐热性并且耐热性也相对比较稳定。 
   根据灭菌工艺对微生物的强热致死效应，通常选用D值不低于1.5—3min的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢（每个指示剂的芽孢含量通常在10（5）—10（7）之间）作为生物指示剂对过热灭菌工艺进行验证。该类指示剂在FO值低于其存活时间（D值*芽孢的对数值-2）时，应当能全部呈阳性结果；当FO值高于其杀灭时间（D值*芽孢的对数值+4）时，所有的生物指示剂均应呈阴性结果。 
   对FO值为15min的灭菌工艺（药典推荐的常用灭菌工艺），可选用D值为1.5min、芽孢含量为10（6）个的微生物指示剂，或其他耐热性相当的微生物指示剂，对其进行验证。 
   根据被灭菌物品的性质来确定所选用不同包装方式的微生物指示剂。灭菌溶液时，多选用 自含型安瓿微生物指示剂；灭菌织物时，多选用芽孢条；灭菌管路时，则可能要选用特殊生物指剂（如用接有芽孢的钢丝、线等）以测试死角处（最冷点）的灭菌情况。 
   选择时，首先，要掌握灭菌前产品中污染菌状况，包括污染菌的数量及其耐热性；其次，测定生物剂在待验证产品及验证用标准溶液中耐热性（D值和F值）；最后，根据产品的最低灭菌工艺条件、灭菌前产品中的污染菌控制要求及最终产品的无菌保证要求， 
用相关公式计算出验证时每个生物指示剂所需要的孢子数量。   
   

 

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