分为平皿菌落计数法、液体培养基直接接种法、薄膜过滤法3种标准。
1、平皿茵落计数法：在药品防腐剂防腐效力测试以及微生物限度检查中，通常采用平皿菌落计数法计数每毫升（或克）样品的微生物含量。参照“验证试验用供试品的制备与检查”进行验证实验，对每种试验菌种来说，每组试验至少独立重复3次（即用3个不同批次的样品）。如果每次试验结果都表明：样品试验组（A）中验证微生物平均生长数量不低于阳性对照组（C）中验证微生物平均生长数量的70%，则认为两组试验的微生物生长数量相同，原检验方法通过验证。
2、液体培养基直接接种法：无菌试验中的直接接种法，要求培养基既能中和抗菌剂的抑菌性，又能支持适合广谱微生物的生长，因此选用的液体培养基应能使样品中潜在的所有微生物完全能够生长。按照“验证试验用供试 品的制备与检查”进行验证试验，对每种试验菌种来讲，每组试验至少独立重复3次。改变产品和培养基的比率以达到中和效果。如果3批（用3个不同批次的样品）实验结果均表明：在14d内所有样品试验组中的液体培养基都显示有大量的微生物生长，则相应的试验方法通过验证。
3、薄膜过滤法：薄膜过滤方法使用范围最广，除适用于无菌产品的无菌检查外，又适用于非无菌产品的限度检查。但关键是样品必须能被过滤。有些样品，如固态粉剂、软膏或乳剂等，在过滤前需要溶解样品。针对需要溶解的药品而通过验证证明该样品的溶解方式及整个试验过程、试验用具和材料以及培养条件等均不会影响产品中固有微生物的生长。其方法是：
（1）样品试验组：将样品溶液通过滤膜，再用适量的淋洗液淋洗滤膜3次，并在最后一次淋洗液中接入少量（10—100CFU）验证菌，淋洗后，将滤膜转移到适当的固体培养基上（或液体培养基中）培养。如果样品的抑菌性很强（如抗生素），过滤前需要对样品进行中和处理，那么，要在过滤前将菌种接入经中和处理过的样品溶液中，以验证中和效果。
（2）蛋白胨对照组：样品为不加产品的A溶液，其他操作及实验条件与样品试验组相同。以考察样品中和用钝化剂（针对需要预处理的样品）过滤器和过滤膜材质是否会影响微生物的生长。
（3）阳性对照组：将与样品试验组和蛋白胨对照组等量的同种验证菌悬液（10—100CFU）直接接种到固体培养基表面（或液体培养基中）。比较蛋白胨对照组和阳性对照组的微生物生长结果，可估计出过滤器和滤膜所造成的微生物损失数量。
如果3次验证（用3个不同批次的样品）试验结果均表明：上述3组试验结果间差异均在 70%以上（固体培养）或在培养14d内所有试验组的液体培养基都显示生长，那么，可认为验证微生物的回收率基本相同，相应的微生物检验方法通过验证。
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