（1）MUG法不必从混合菌中分离单个菌落。除大肠埃希菌外，尚有部分志贺菌属、沙门菌属的菌株，以及少数革兰阳性球菌、杆菌和芽孢菌，其MUG为阳性。因此，在MUG培养基成分中增加了去氧胆酸钠，可排除革兰阳性菌的干扰。至于志贺菌、沙门菌在胆盐乳糖培养基中较难生长，即使有生长，本法也能检出。既然药品中不得检出大肠埃希菌，更不允许检出志贺菌、沙门菌。
（2）配制MUG培养基时，务必校正pH，灭菌后pH不得过7.4，否则pH偏高，MUG分解，本身则显荧光；分装MUG培养基的试管应挑选，试管、蛋白胨不得显荧光。
（3）培养时间：供试品培养液接种于MUG培养基中的培养时间，一般在4h、24h 观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能准确判断时，该延长培养至48h再观察结果。由于大肠埃希菌各菌株间的MUG的属性不完全相同，对底物和底物浓度反应的差异；培养基中选择因子的影响；培养时间；温度；pH的改变；大量竞争菌和样品本身物质成分的干扰等；对结果的判断亦有影响。
（4）结果观察：取供试品的MUG试管、阳性对照管。阳性对照管同时在366nm紫外灯下观察，阳性对照管应有较强蓝白色荧光，阴性对照管无荧光。试品MUG管是否有荧光，应仔细观察比较，或将各管调换位置（阴性管居中），适当倾斜试管，阳性对照管荧光强烈，影响供试品管与阴性对照管的观察时，亦该移去阳性对照管。
（5）药品中污染的大肠埃希菌，易受生产工艺及药物的影响。在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上的菌落形态特征有变化时，挑取可疑菌落往往凭经验，主观性较大，务必挑选23个以上菌落分别做IMVIC试验鉴别，挑选菌落越多，挑选阳性菌的机率越高，如仅挑选一个菌落 IMVIC试验的鉴别，则易漏检。
（6）在IMVIC试验中，以灭菌接种针沾取菌苔，首先接种于枸橼酸盐琼脂斜面上，然后接种于蛋白胨水培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基中。切勿将培养基带入枸橼酸盐琼脂斜面上，以免产生假阳性结果。枸橼酸盐利用试验培养时间，原定为2d，根据试验资料，发现培养3d后，枸橼酸盐利用试验产生阳性。仅培养2d是不够的，故试验培养时间改为2—4d。
（7）阳性对照试验是检查供试品是否有抑菌作用及培养条件是否适宜。阳性对照菌液的制备、计数及加入含供品的培养基中等操作，不能在检测供试品的无菌室或净化台上进行，必须在单独的隔离间或净化台操作，以免污染供试品及操作环境。
（8）在各类供试品中检测大肠杆菌及其他控制菌，按一次检出结果为准，不准抽样复检。检出的大肠埃希菌及其他控制菌培养物须保留 1 个月，复查。
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