抗生素微生物检定——管碟法 1

  抗生素微生物检定系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。它包括两种方法，管碟法和浊度法。 
  测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的1105时，应调整其估计效价，重新试验。除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。 
  管蝶法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，测定供试品效价的一种方法。 
1、菌悬液的制备 
（1）枯草芽孢杆菌悬液取枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35—37℃培养7d，用革兰染色法涂片镜检，应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30min，备用。 
（2）短小芽孢杆菌悬液取短小芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。 
（3）金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35—37℃培养20—22h。临用时，用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。 
（4）藤黄微球菌悬液取藤黄微球菌的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26—27℃培养24h，或采用适当方法制备的菌斜面，用培养基III或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。 
（5）大肠埃希菌悬液取大肠埃希菌的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35—37℃培养20—22h。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。 
（6）啤酒酵母菌悬液取啤酒酵母菌V的号培养基琼脂斜面培养物，接种于IV号培养基琼脂斜面上。在32—35℃培养24h，用灭菌水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中，振摇均匀，备用。 
（7）肺炎克雷伯菌悬液取肺炎克雷伯菌的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35—37℃培养20—22h。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。 
（8）支气管炎博特菌悬液取支气管炎博特菌的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在32—35℃培养24h。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。 
2、标准品溶液的制备标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。 
   供试品溶液的制备：精密称（或量）取供试品适量，用各药品项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量的规定稀释至与标准品相当的浓度。 
3、双碟的制备取直径约90mm，高16—17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基20ml，使在碟底 内均匀摊布，放置水平面上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至48—50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18—22mm，三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15—18mm），摇匀，在每一双碟中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，在每一双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管（内径6.0mm士0.1mm，高10.0mm士0.1mm，外径7.8mm士0.1mm）4个（二剂量法）或6个（三剂量法），用陶瓦圆盖覆盖备用。 
4、检定法 
（1）二剂量法取照上述方法制备的双碟不得少于4个，在每一双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液，其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2：1或4：1。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈直径（或面积），照生物检定统计法中的法进行可靠性测验及效价计算。 
（2）三剂量法取照上述方法制备的双碟不得少于6个，在每一双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度（S3）、中浓度（S2）及低浓度（S1）的标准品溶液，其余3个小管中分别滴装相应的高、中、低3种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为1：0.8。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈直径（或面积 ），照生物检定统计法中的（3.3）法进行可靠性测验及效价计算。   
   

 

上一篇：制备趋势分析图进行分析

下一篇：抗生素微生物检定——浊度法