试管法凝集实验

  玻片法凝集实验为定性实验，方法简便快速，但有时会出现非特异性的凝集。试管法凝集实验则是鉴定细菌更为准确可靠的定量实验。常用于脑膜炎球菌、霍乱弧菌、布鲁菌、沙门菌的鉴定，试管法凝集实验也可用于血清学诊断。下面以肥达实验为例对实验步骤进行说明。 
    肥达实验是根据凝集反应的原理，用已知的伤寒沙门菌鞭毛抗原及菌体抗原、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原、肖氏沙门菌鞭毛抗原与患者血清作定量凝集实验，以协助诊断肠热症。 
【材料】 
 1、伤寒沙门菌鞭毛抗原（H）、伤寒沙门菌菌体抗原（O）、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原（A）、肖氏沙门菌鞭毛抗原（B）。 
2、可疑患者血清、0.9%氯化钠等。 
【操作】 
1、于试管架上放4排小试管，每排8支。 
2、稀释待检患者血清取一中试管，加0.9%氯化钠3.8ml和患者血清0.2ml，充分混匀，此时血清稀释度为1：20，吸此血清2ml分别加入每排的第1管中，每管0.5ml。此时中试管内剩余稀释血清2ml，再加入0.9%氯化钠溶液2ml，使之稀释成1：40。再加入每排的第2管中，每管0.5ml。以此类推，将中试管内剩余血清依次作倍比稀释，并依次将稀释血清加至每排第3至第7管中，则每排各管的血清稀释度依次为1：20，1;40，1:80，1:160，1:320，1:640，1:1280。每排第8管不加血清，只加0.5ml0.9%氯化钠作为对照。 
3、加入菌液：由第8管开始 向前加入诊断菌液： 
   第一排各管加入伤寒沙门菌鞭毛抗原（H）菌液0.5ml。 
   第二排各管加入伤寒沙门菌菌体抗原（O）菌液0.5ml。 
   第三排各管加入 甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原（A）菌液0.5ml。 
   第四排各管加入 肖氏沙门菌鞭毛抗原（B）菌液0.5ml。 
   此时各管的血清稀释度又各增加1倍，依次为1;40，1:80，1:160，1:320，1:640，1:1280，1：2560。每管总量1.0ml。 
4、振荡混匀，置3℃温箱中温育18—24h小时，取出观察并记录结果。 
【结果】观察结果时，先不要摇动试管，观察试管内上清液和管底细菌凝集的特点，然后轻摇试管使凝集物从管底升起，按液体的浊度、凝集块的大小记录凝集程度。另外观察结果时，要先看阴性对照管，阴性对照管不凝集时，方可观察实验管，否则可能系菌液自凝引起，需更换诊断菌液重新检测。 
    凝集程度以“+”多少表示。 
    + + + +：上层液澄清透明，细菌全部凝集沉于管底。 
    + + +：上层液基本透明，大部分细菌（75%）凝集沉于管底。 
    + +：上层液半透明，管底有明显（50%）凝集物。 
    +：上层液混浊，管底仅有少量凝集物。 
    一：不凝集，液体呈乳状与对照管相同。 
    效价定义：能使定量抗原呈“+ +”凝集的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。   
   

 

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