尿标本的定量培养法

  虽然正常人的尿液是无菌的，但由于肛门与尿道口相隔很近，所以尿标本极易受到粪便中细菌的污染。另外，正常人外尿道有正常菌群如大肠埃希菌、葡萄球菌等存在，该菌又是尿道感染常见的病原菌。为了鉴别尿中细菌是污染菌还是泌尿系感染病原菌，有必要对尿中细菌数量进行测定，以作出正确的评价。本实验介绍尿标本中细菌的定量培养法。 
【材料】 
1、无菌离心管。 
2、普通琼脂平板或营养琼脂平板。 
3、离心机。 
4、无菌0.9%氯化钠溶液 
【操作】 
一、标本的采集 
    要做好细菌学检查，首先应注意标本的采集。其关键环节是要求严格的无菌操作，其次，任何方法采集标本都应严格遵守在用药前进行并尽快送检。尿液标本的采集同样要遵循这些原则。尿液标本采集方法如下： 
1、中段尿采集法 
   女性：用肥皂水清洗外阴部后，再用清洁水冲洗，用无菌棉球或纱布擦干，将阴唇分开排尿，将前段弃去10—20ml，留中段尿5—10ml于一灭菌瓶内。 
   男性：用肥皂水清洗尿道口后再用清水冲洗，留中段尿。包皮过长者应将包皮翻开冲洗。 
2、肾盂尿采集法为确定尿中细菌是否来自肾脏，可用导尿管采集肾盂尿。充分冲洗膀胱，以最后一次冲洗尿作对照，后用导尿管插入输尿管，分别标记左右侧，收集3次尿液· 
二、定量培养法 
1、定量接种环法将尿液充分混匀后，用经过校正的定量（0.001ml/环）接种环取尿液1环，在琼脂平板上作均匀涂布，然后置于37℃培养18—24h小时，计数菌落。 
2、微量可调移液器法将尿液充分混匀后，以无菌0.95氯化钠溶液将尿液作10倍系列稀释，用经过校正的微量可调移液器吸取尿液100ul置平板上，迅速以灭菌L型玻棒将尿液均匀铺开，然后将平板以底在下、盖在上的方式置桌面上10分钟以使尿液被平板充分吸收后，再将平板倒置于37℃温箱培养18—24h小时，计数菌落。按下面公式计算每毫升尿液中的细菌数，计数的原则同水卫生细菌学检查中细菌总数的检验： 
每毫升尿液的菌数=平板上菌落数*稀释倍数/接种尿（ml）                                      
三、报告方式及意义 
    直接报告每毫升尿液中的细菌数。如定量接种环含量为0.001ml，平板上菌落为100个，则每毫升尿液内所含的细菌数为100000个。 
   尿液细菌培养阳性时，必须根据细菌数判断是否有泌尿系统感染。检出同一种细菌时，革兰阴性杆菌>100000CFU/ml时可认为是病原菌，有人认为进行一次尿液细菌定量培养，若菌数在100000CFU/ml以上，准确率为80%，两次检 出同一细菌在100000CFU/ml以上，准确率为91%，三次检 出同一种菌且菌数在100000CFU/ml，则其准确率达95%；尿液细菌含量在10000-100000CFU/ml之间时为可疑，应重复检查；<10000CFU/ml时可视为污染；若检出革兰阳性球菌，则以每毫升尿液中>10000CFU/ml视为病原菌。在严格无菌手续下送检膀胱穿刺或导尿之尿液进行培养时，无论菌数多少，均应视作病原菌。如输尿管尿菌数比对照尿菌数多、或第3次尿比第1次尿菌数多，则该菌可能够来自肾脏。    
   

 

上一篇：塑料板法肥达实验

下一篇：厌氧性细菌鉴别技术