分枝杆菌属的培养特性观察

 结核分枝杆菌为专性需氧菌，培养要求特殊，生长缓慢，37℃培养4—6周才出现肉眼可见的菌落，人工培养时pH6.5—6.8最为适宜。在液体培养液中生长稍快，2—3周后可见菌膜生长，临床标本要培养至 , 2个月无菌生长，且连续3次培养均无菌生长才能报告结核分枝杆菌培养阴性。 
【材料】 
1、结核分枝杆菌在改良罗氏培养液上的培养物。 
2、耻垢分枝杆菌在改 良罗氏培养液上的培养物。 
【方法及结果】 
    结核分枝杆菌于改良罗氏培养液上生长情况及菌落特点：生长缓慢，菌落干燥呈颗粒状、乳白色或米黄色、不透明、表面呈皱纹状、形似花菜心的菌落。 
    耻垢分枝杆菌在改良罗氏培养液上生长的菌落特点：生长速度较快，5—7天可见菌落，菌落粗糙，有的能产色。涂片抗酸染色呈抗酸阳性菌，多为短杆菌和球杆菌。但非结核分枝杆菌经煮沸1min分钟即失去抗酸性。 
    取少许上述两种培养液上菌落置0.9%钠溶液小滴中于玻片上研磨，耻垢分枝杆菌很易被乳化，但结核分枝杆菌不易被乳化。 
    非结核分枝杆菌在液体培养液中生长，看不到结核分枝杆菌那种细菌相互粘连按纵轴平行排列成索状的现象，即索状因子阴性。 
    生化反应：非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌的生化反应特性见表 。 
                  表    结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的生化特性 
    菌种         糖发酵     触酶     热触酶     中性红     碲盐还原   索状因子 
 结核分枝杆菌      -          +         -          +           -          +
非结核分枝杆菌     +          +         +         + -           +          -
触酶实验与热触酶实验： 
（1）从罗氏培养液上各取生长丰满的人型结核分枝杆菌与堪萨斯分枝杆菌10mg左右，分别加入含0.067mol/l、PH7.4的PBS至1.0ml，并置于小试管中，制成细菌悬液。 
（2）分别将上述2种菌悬液（各1ml）装入4支小试管中（各0.5ml），取2种菌悬液各1支置68℃水浴内保温20分钟，取出后冷却至室温，分别向4支菌悬液管内沿管壁徐徐加入新鲜配制的30%H2O2和10%吐温-80等量混合液0.5ml，勿摇动，观察结果。 
（3）结果观察：液面出现气泡者为阳性，20分钟内无气泡为阴性。未经热处理的2支菌均出现触酶阳性，经加热处理后，人型结核分枝杆菌热触酶实验转为阴性，而非结核分枝杆菌热触酶实验仍为阳性。   
   

 

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