1、准备自冰箱中取出试剂后，应置室温平衡20—30分钟使用。
2、配洗涤液以蒸馏水稀释浓缩洗涤液即可。
3、稀释标本在小试管内加稀释液100ul、再加蒸馏水400ul混匀，作为应用稀释液。加被检血清5ul（1：100）；尿和脑脊液不经稀释而直接加50ul入孔内；胸腹水取25ul于0.5ml应用稀释液中（1：20稀释，血性胸、腹水作1;10稀释即可）混匀。
4、加样本分别吸取稀释样本50ul于酶标条孔内，并设临界和阳性对照各1孔，分别加入临界血清、阳性血清50ul，37℃水浴10分钟，洗涤液洗涤3次，每次1分钟，于吸水纸上拍干。
5、加酶结合物每孔加酶标记抗体应用液1滴，置37℃水浴1分钟，洗涤液冲洗6次，每次1分钟，于吸水纸上拍干。
6、加底物及终止反应每孔加底物I1滴、底物II1滴，37℃水浴1分钟，每孔再加终止液1滴终止反应，混匀后判断结果。
【结果】
1、抗体-lgM的检测加终止液后，以空白对照孔校零，在波长450nm处读取各孔的吸光值（A），凡A值>阴性对照孔均数的2倍的样品孔，即为阳性。
2、抗体-lgM的检测
目测法：呈现蓝色深于临界孔者为阳性，可按呈色深浅判定（+）——（+ + + +）表示阳性程度（阳性对照孔为+ +）。
比色法：每孔加终止液终止后用450nm波长进行比色计算，报告单位数。
测定单位=测定孔OD值 *100/临界孔OD值 （>100单位者为阳性）
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