疑似白喉患者咽拭子的细菌学检查

【材料】 
1、疑似白喉患者的咽拭子标本。 
2、载玻片、革兰染色液、美蓝染色液、奈瑟染色液。 
3、吕氏血清斜面、血琼脂及亚碲酸钾血琼脂平板、淀粉及糊精发酵管。 
【操作】 
  一、检查程序
二、操作： 
1、直接镜检 
（1）涂片：取载玻片两块，将疑似白喉患者的咽拭子于每块载玻片中部轻轻滚动，涂片范围约2cm*1cm，干燥后固定（涂片前应先接种平板以减少污染）。 
（2）染色：将制备好的涂片，一片用革兰染色，另一片用美蓝染色
（3）观察：涂片经革兰染色后，注意有无革兰阳性、细长、菌体一端或两端膨大呈棒状的杆菌，菌体有无着色较深的紫色的“异染颗粒”，排列是否规则。涂片经美蓝染色后，注意有无菌体呈浅蓝色、异染颗粒呈深蓝色的棒状杆菌。如发现有革兰阳性棒状杆菌、排列不规则、有明显异染颗粒，或美蓝染色发现具有明显异染颗粒的棒状杆菌，均应报告“找到棒状杆菌”，而不直接报告“找到 白喉杆菌”。 
2、初步鉴定 
（1）将上述咽拭子标本接种于 吕氏血清斜面，37℃培养6—8小时。白喉棒状杆菌在本培养液上较其他咽喉中的细菌生长快，菌落呈灰白色、有光泽、圆形、凸起、光滑。取菌落涂片，奈瑟染色（或其他染色），镜检可初步鉴定。 
（2）再将咽拭子标本分别接种于血琼脂及亚碲酸钾血琼脂平板，37℃培养24小时以分离纯种。观察血琼脂平板上有无灰白色、不溶血或溶血（轻型白喉杆菌）的菌落，亚碲酸钾血琼脂平板上有无黑色的菌落。 
（3）从血琼脂及亚碲酸钾血琼脂平板上各取典型菌落涂片、染色（革兰染色或美蓝染色或奈瑟染色），注意染色性、菌体形态与排列、有无异染颗粒。 
3、纯培养取上述培养液上的典型菌落（镜检初步证明系白喉棒状杆菌 ）接种于吕氏血清斜面作纯培养（供生化实验及毒力实验用），37℃培养24h小时。 
4、生化实验从上述吕氏血清斜面上挑取菌落接种于淀粉及糊精发酵管，37℃培养24h小时，观察是否分糖淀粉及糊精。 
5、毒力实验。   
   

 

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