钩端螺旋体的显微镜凝集（显凝）实验

【原理】  钩端螺旋体显凝实验是一种血清学反应，可用已知的抗原（标准菌株）来测定患者血清中的未知抗体及其效价来进行辅助诊断；也可用已知的抗体（标准免疫血清）来鉴定未知菌株的型别作血清学鉴定。钩体运动活泼，在暗视野显微镜下，明显可见，若遇到相应抗体时可发生凝集。如血清中的补体未灭活，时间过久出现凝集的钩体发生溶解，则为钩体的凝（集）溶（解）实验。 
 【材料】 
1、抗原的选择和制备：将我国15群15型钩端螺旋体代表株接种于：Korthof培养液中，28℃培养5—7天，暗视野显微镜检查，暗视野显微镜400倍观察每视野下不少于50条，运动活泼且无 自凝者可作显凝抗原。 
2、钩体免疫血清（家兔免疫血清）做血清学诊断时用疑似患者的血清。 
3、1ml无菌吸管、无菌试管、清洁载玻片及盖玻片、0.9%氯化钠溶液、塑料凹孔板、24—28℃温箱。 
【方法】 
1、用0.95氯化钠溶液将钩端螺旋体免疫血清自1:50开始，做50倍系列稀释，直到1:1600。 
2、取各稀释度免疫血清0.1ml分别加入塑料凹孔板中，最后1孔加0.1ml0.9%氯化钠溶液作对照。 
3、每孔加0.1ml钩端螺旋体纯培养物，摇匀，置28—30℃温箱。 
4、2小时后用接种环 自各孔中取1—2环于载玻片上，置暗视野显微镜下观察。 
【结果】  先观察阴性对照孔，该孔如出现凝集则实验失败。该孔无凝集时方能观察实验孔，根据凝集程度以“+”记录结果，结果判定参照如下标准进行。 
-：完全无凝集，与对照管相同。 
+：25% 以上钩端螺旋体凝集呈小蜘蛛状，大多数游离且运动活泼。 
+ +：50%以上钩端螺旋体凝集呈蜘蛛状，约有半数未凝集。 
+ + +：75%以上钩端螺旋体凝集呈蜘蛛状，其间有少数游离。 
+ + + +：几乎全部钩端螺旋体凝集呈巨大蜘蛛状，偶见极少数游离钩端螺旋体存在。 
    效价判定：出现“+ +”的血清最高稀释度（终末稀释度———加入等量抗原后的稀释度）为该血清的凝集效价。测定患者血清时，单份血清效价1：300以上有诊断意义，双份血清呈4倍以上升高时，更有诊断价值。    
   

 

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