伯氏疏螺旋体的血清学实验

   伯氏疏螺旋体是引起莱姆病的病原体。病原学诊断的主要方法是分离培养、聚合酶链反应及血清学实验。由于分离培养耗时长，所以一般常用ELJSA技术检测血清中的抗体，结果可疑时，再以免疫印迹技术证实。 
【材料】 
1、可疑莱姆病患者血清。 
2、ELJSA检测抗伯氏螺旋体lgM抗体试剂盒 
（1）伯氏螺旋体41kd鞭毛蛋白抗原包被96孔酶标板。 
（2）阳性、弱阳性、阴性对照血清。 
（3）标本稀释液。 
（4）酶标抗体（HRP标记羊抗人lgM）。 
（5）底物：用磷酸盐-枸橼酸缓冲液配置的TMB·H2O2。 
（6）反应终止液（1mol/l硫酸溶液）。 
（7）洗涤液。 
【方法】 
1、用标本稀释液将患者血清按1：100稀释，即取2ul血清与200ul标本稀释液混合，置37℃20分钟。 
2、各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待检标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100ul标本稀释液，盖好反应板，37℃孵育20分钟。 
3、甩尽板中液体，用200—300ul洗涤液洗5次，每次均需拍干。  
4、每孔加酶标记抗体标抗人lgM抗体100ul，盖好反应板，37℃孵育30分钟。 
5、甩尽板中液体，洗5次，每次拍干。 
6、加底物TFMB-H2O2 100ul，混匀，37℃温育15分钟。 
7、加终止液1mol/l硫酸50ul，用酶标仪450nm测其OD值。 
【结果】 
1、阴性对照平均OD值须<0.20。 
2、弱阳性对照平均OD值须在0.20—0.25。 
3、弱阳性对照与阴性对照的平均OD值之比须大于或等于2。 
    符合以上3个条件，本次实验结果可信，否则重复实验。 
4、若待检标本孔显色比弱阳性对照孔深，则判为阳性，即以P/N>2.1为阳性。 756   
   

 

上一篇： 荧光密螺旋体抗体吸附实验（FTA-ABS）

下一篇：立克次体鉴别技术