外斐反应

【原理】某些变形杆菌菌株的菌体耐热多糖与斑疹伤寒等立克次体有共同抗原成分，能与抗立克次体抗体发生交叉凝集反应，由于变形杆菌易于培养，因此用这些变形杆菌菌株的抗原代替立克次体抗原与患者血清做试管凝集反应，称外斐反应。用以检查血清中有无相应的抗体，辅助诊断立克次体病。一般诊断普氏和斑疹伤寒立克次体时，变形杆菌菌体抗原OX2及OX19阳性，诊断恙虫病立克次体则变形杆菌菌体抗原OXk阳性。Q热柯克斯体的外斐反应阴性，其血清学诊断常采用I和II两相抗原进行补体结合实验。 
【材料】 
1、待检患者血清。 
2、变形杆菌OXk、OX2及OX19诊断菌液。 
3、其他小试管、吸管、记号笔等。 
【方法】 
1、取3排小试管，每排9支并标号。 
2、取0.9%氯化钠溶液2.7ml与被检血清0.3ml于中试管内混匀，使之成1：10稀释血清，于每排第1管内各加入0.5ml。 
3、将中试管内再补加0.9%氯化钠溶液1.5ml，混匀后使之为1：20的稀释血清，并加于每排第2管内，每管0.5ml。 
4、依次连续作倍比稀释血清至各排第8管，第9管只加0.5ml0.9%氯化钠溶液以作抗原对照。 
5、将OXk、OX2及OX19 3种诊断菌液（抗原），分别加入3排的9支试管内，每管0.5ml。加入菌液后各排第1管至第8管的血清最终稀释度依次为1：20，1;40，1；80，1：160，1：320，1：640，1：1280，1：2560.
6、振摇30秒左右，于37℃孵育过夜，次日观察结果。 
7、观察凝集现象。注意观察前不要晃动试管，与对照管比较，判定凝集程度。 
【结果】 外斐反应的结果判断同肥达反应，以凝集效价判断之。此实验所用抗原为O抗原，故阳性凝集现象与伤寒沙门菌O抗原相似，即凝块成颗粒状。能使凝集呈“ + +”的血清最高稀释度为本实验的凝集效价。双份血清效价4倍升高可作为新近感染立克次体的指标。单份血清凝集效价超过1：160时才有诊断意义。   
   

 

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