细胞培养分离衣原体

   由于衣原体缺乏代谢酶，致使它在无生命的培养液上不能生长，只能使用细胞培养才能进行该病原体的分离。 
【材料】 
1、McCOY细胞。 
2、衣原体标本运送培养液、细胞生长培养液，磷酸盐缓冲液（PBS），放线菌酮（一种抗代谢药物，可以抑制真核细胞代谢而不抑制原核细胞生长繁殖，从而有利于衣原体繁殖）。 
3、平底细胞培养瓶，吸管、毛细吸管。 
【方法】 
1、标本的采集和运送标本中必需含有上皮细胞，因为衣原体是在细胞内增殖。含1ml运送培养液的小试管内放有23颗无菌小玻璃珠。采集标本的拭子放入试管内，将患者标本洗到运送培养液中，拭子经灭菌处理后适当处理。小试管用冰壶带回实验室。将试管置震荡器上，猛烈震荡20秒，使感染细胞破碎，释放出原体。可立即接种或置-70ssd2冰箱保存，接种时快速融化。                                                      
2、制备单层McCOY细胞管：McCOY细胞在组织培养瓶中生成致密单层，经0.25%胰酶消化后，加入细胞生长液，配成约含100000细胞/ml的细胞悬液，吸取1ml分装于细胞培养小瓶中，瓶底预先置一约12mm*12mm的盖玻片，在二氧化碳培养箱中37℃培养24—48小时，使细胞在盖玻片上形成单层。 
3、接种标本取已生长好的McCOY细胞管，吸去上清，每管加入1ml细胞生长液及0.2ml处理的标本液，2000—3000r/min离心1小时，促使衣原体进入细胞，然后置5%二氧化碳温箱中1—2小时。吸去上清，加入含1ug/ml放线菌酮的营养液，置37℃ 5%二氧化碳培养箱中培养48小时。 
4、取出盖玻片，用PBS洗2—3次，风干，用无水甲醇固定后，用于碘染色（包涵体呈棕褐色）或姬姆萨染色，或用丙酮固定后用荧光抗体染色，结果观察同前所述。   
   

 

上一篇：金标免疫斑点法检测沙眼衣原体抗体

下一篇：呼吸道传播的病原微生物鉴别及电镜图谱