4、大肠埃希氏菌
4.1多管发酵法4.1.1范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌。本法适用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希氏菌的测定。4.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准4.1.2.1大肠埃希氏菌多管发酵法multiple tube fermentation technique for Escherichia coli大肠埃希氏菌多管发酵法是指多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5℃ 培养24h产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法4.1.3培养基与试剂4.1.3.1 EC - MUG培养基4.1.3.1.1成分 A 胰蛋白陈 20.0g B 乳糖 5.0g C 3号胆盐或混合胆盐 1.5g D 磷酸氢二钾 4.0g E 磷酸二氢钾 1.5g F 氯化钠 5.0g G 4-甲基伞形酮书-β-D-葡萄糖醛酸昔（MUG）0.05g4.1.3.1.2制法 将干燥成分加人水中，充分混匀，加热溶解，在366nm紫外光下检查无自发荧光后分装于试管中，68.95 kPa (115℃，10lb）高压灭菌20min，最终pH为6.9士0.2
4.1.4仪器4.1.4.1紫外光灯：6W、波长366nm的紫外灯，用于观测荧光反应4.1.4.2培养箱：36℃ 士1℃ 。4.1.4.3天平。4.1.4.4平皿：直径为9cm4.1.4.5试管4.1.4.6分度吸管：1 ml , 10 mL4.1.4.7锥形瓶。4.1.4.8小倒管4.1.4.9金属接种环4.1.4.10冰箱：O℃ 一4℃ 。4.1.5检验步骤4.1.5.1接种 将总大肠菌群多管发酵法初发酵产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测。用烧灼灭菌的金属接种环或无菌棉签将上述试管中液体接种到EC-MUG管中。4.1.5.2培养 将已接种的EC-MUG管在培养箱或恒温水浴中44.5℃ 士0.5℃ 培养24h士2h。如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴的液面超过EC-MUG管的液面。4.1.6结果观察与报告 将培养后的EC一MUG管在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。计算EC-MUG阳性管数，查对应的最可能数（MPN）表得出大肠埃希氏菌的最可能数，结果以MPN/100 ml报告。4.2滤膜法4.2.1范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌本法适用于生活饮用水及其水源水中大肠埃希氏菌的测定4.2.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.2.2.1大肠埃希氏菌谁膜法membrane rilter technique for Escherichia coli用滤膜法检测水样后，将总大肠菌群阳性的滤膜在含有荧光底物的培养基上培养，能产生-β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。4.2.3培养基与试剂4.2.3.1 MUG营养琼脂培养基（NA—MUG )
4.2.3.1.1成分
A 蛋白陈 5.0g
B 牛肉浸膏 3.0g
C 琼脂 15.0g
D 4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（MUG）0.1g
E 蒸馏水 1000 ml
4.2.3.1.2制法 将干燥成分加入水中，充分混匀，加热溶解．103.43kPa ( 121℃，15lb）高压灭菌15min，最终pH为6.8士0.2在无菌操作条件F倾倒直径50mm平板备用。倾倒好的平板在4℃条件下可保存两个星期 本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL——3ml于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养4.2.4仪器4.2.4.1紫外光灯：6W、波长366 nm的紫外灯，用于观测荧光反应4.2.4.2其他仪器同2.2.44.2.5检验步骤4.2.5.1接种 将总大肠菌群滤膜法有典型菌落生长的滤膜进行大肠埃希氏菌检测。在无菌操作条件下将滤膜转移到NA-MuG平板上，细菌截留面朝上，进行培养4.2.5.2培养将已接种的NA-MUG平板36℃士1℃培养4h。4.2.6结果观察与报告 将培养后的NA-MUG平板在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。记录有蓝色荧光产生的菌落数并报告，报告格式同总大肠菌群滤膜法格式
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