出口畜产品中炭疽杆菌检验方法——3

A5 洗样液
吐温-20 2.5mL
蒸馏水 1 000mL
将吐温-20加于蒸馏水中,充分搅匀,分装于三角烧瓶或试剂瓶内,121℃高压灭菌。贮存于 0～4℃冰箱,备用。
A6 生理盐水
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000.00mL
待氯化钠完全溶解后,分装于三角烧瓶或试剂瓶内,121℃高压灭菌 20min。
A7 缓冲生理盐水
无水磷酸氢二钠 1.42 g
氯化钠 8.50 g
蒸馏水 1 000.00 mL
将各成分加于蒸馏水中,加热搅拌使完全溶解。如欲长期保存,可加 0.1g硫柳汞(最终浓度为 0.01％)。
A8 固定液
无水乙醇 600 mL
三氯甲烷 300 mL
甲醛溶液(36％～38％) 100 mL
将三种成分混匀,贮存于磨砂口带盖试剂瓶内。
A9 炭疽杆菌噬菌体γ或 ω型的均可使用。
A10 革兰氏染色液及染色方法
A10.1 Hucker 氏结晶紫液
A液：结晶紫(或龙胆紫) 2.0g�� 
     乙醇(95％) 20.0mL
B液：草酸铵 0.8g
     蒸馏水 80.0 mL
将 A、B两液混匀,放置 24 h后,用粗滤纸过滤。贮于磨砂口滴瓶内。 
A10.2 革兰氏碘液碘 1.0 g碘化钾 2.0 g蒸馏水 300.0 mL 将碘和碘化钾放于乳钵内,研成细粉。先后分三次分别加蒸馏水1mL 、5mL和10 mL,继续研磨至完全溶解,倒入褐色瓶中。再加水将残留于乳钵的碘液洗入瓶中,补加蒸馏水至300mL。
A10.3 脱色剂95％乙醇 适量贮于磨砂口滴瓶中。
A10.4 Hucker氏复染液(贮备液)沙黄 O 2.5 g乙醇(95％) 100mL临用时,取适量贮备液,加蒸馏水稀释成 1:10稀释液。
A10.5 染色方法
a. 于载玻片上制备涂膜,自然干燥；
b. 将玻片浸入固定液内,固定 1 min；
c. 加结晶紫于涂膜上,染色 1 min；
d. 用水冲去染色液,淋去多余的水； 
e. 加革兰氏碘液于涂膜上,媒染 1 min；
f. 用水冲去碘液；
g. 连续加 95％乙醇流过涂膜,至无紫色脱掉；
h. 用水冲洗玻片,淋去多余的水；
i. 加复染液于涂膜上,染色 10～30 s；
j. 用水冲去染色液；
k. 用吸墨纸吸干水分或自然干燥；
l. 镜检。
A11 大豆凝集素稀释液按试剂使用说明制备工作稀释液,贮于 4℃冰箱备用。
附加说明：本标准由中华人民共和国进出口商品检验局提出。本标准由中华人民共和国内蒙古进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人甄宏太、周云霞
中华人民共和国国家进出口商品检验局 1994-12-26批准 1995-05-01实施   
   

 

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