附 录 A 培 养 基 制 备 (补充件)
A1 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基(MYP)
a. 基础琼脂
牛肉膏 1.0g
蛋白胨 10.0g
D-甘露醇 10.0g
氯化钠 10.0g
琼 脂 15.0g
酚 红 0.025g(配成溶液加入)
蒸馏水 稀释至900mL
b. 50％卵黄液 50mL
c. 多粘菌素B 100 IU/mL
将a.中的前5种成分加入蒸馏水中加热溶解,校正pH至7.2±0.1,加入酚红溶液,混匀后分装烧瓶中,每瓶225 mL。121℃高压灭菌15min。用时加热溶化,冷至50℃后每瓶加入50％卵黄液12.5mL和2.5mL多粘菌素B溶液,混匀后倾注灭菌平皿,每皿15～18mL。用前应将平板置室温约24 h。
注：①50％卵黄液：取鲜鸡蛋,用硬刷将蛋壳彻底洗净,沥干,放于70％酒精溶液中浸泡1 h。以无菌操作取出卵黄,加入等量灭菌生理盐水,混匀后备用。
②多粘菌素B溶液：在50mL灭菌蒸馏水中溶解500 000国际单位的无菌硫酸盐多粘菌素B。
A2 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤
胰酪胨 17.0g
植物胨 3.0g
氯化钠 5.0g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸馏水 稀释至1000mL
pH7.3±0.1
将上述各成分溶解在蒸馏水中,煮沸2min,分装大试管,每管15 mL,121℃高压灭菌15min。临用时每管加入0.5％多粘菌素B溶液0.1mL混匀即可。
注：多粘菌素B溶液：在33.3mL灭菌蒸馏水中溶解500 000国际单位无菌硫酸盐多粘菌素B。
A3 酚红葡萄糖肉汤
(月示)胨 10.0g
牛肉膏 1.0g
氯化钠 5.0g
葡萄糖 5.0g
酚 红 0.018g(配成溶液加入)
蒸馏水 稀释至1000mL
pH7.4±0.1
将除酚红外的各成分溶解于蒸馏水并稀释至1000mL。校正pH后加入酚红溶液,混匀,分装试管,每管3 mL。121℃高压灭菌10min备用。最终pH7.4±0.1
A4 硝酸盐肉汤
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 5.0g
硝酸钾 1.0g
蒸馏水 稀释至1000mL
pH7.0±0.1
将上述各成分溶解于蒸馏水并稀释至1000mL。校正pH后分装试管,每管5mL,121℃高压灭菌15min。
A5 营养琼脂
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 5.0g
琼 脂 稀释至1000mL
pH7.2±0.1
将各成分于蒸馏水中加热溶解。校正pH后分装试管,每管5～7mL；或分装烧瓶,每瓶100～150mL。121℃高压灭菌15 min。将试管取出,制成斜面；如制平板,可将灭菌的琼脂冷至45～50℃倾注灭菌平皿,每皿18～20mL。
A6 L-酪氨酸营养琼脂
营养琼脂 100mL
5％灭菌L-酪氨酸悬液 10mL
将100mL营养琼脂溶化,冷至45℃,加入5％的灭菌L-酪氨酸悬液10mL,充分混匀后,分装试管,每管3.5mL。制成的斜面应迅速冷却防止L-酪氨酸分离而出。
注：L-酪氨酸悬液：将0.5g酪氨酸加10mL蒸馏水混匀,121℃高压灭菌15min。
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