中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中蜡样芽孢杆菌——4

附　录 A　培 养 基 制 备 (补充件)
A1 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基(MYP)　　
a. 　基础琼脂 　　　 　
牛肉膏　1.0g　　　 　
蛋白胨 10.0g　　　 　
D-甘露醇 10.0g　　　 　
氯化钠 10.0g　　　 　
琼　脂 15.0g　　　 　
酚　红 0.025g(配成溶液加入)　　　 　
蒸馏水　　稀释至900mL　　
b. 50％卵黄液 50mL　　
c. 多粘菌素B 100 IU/mL　　
  将a.中的前5种成分加入蒸馏水中加热溶解,校正pH至7.2±0.1,加入酚红溶液,混匀后分装烧瓶中,每瓶225 mL。121℃高压灭菌15min。用时加热溶化,冷至50℃后每瓶加入50％卵黄液12.5mL和2.5mL多粘菌素B溶液,混匀后倾注灭菌平皿,每皿15～18mL。用前应将平板置室温约24 h。　
　注：①50％卵黄液：取鲜鸡蛋,用硬刷将蛋壳彻底洗净,沥干,放于70％酒精溶液中浸泡1 h。以无菌操作取出卵黄,加入等量灭菌生理盐水,混匀后备用。　
　②多粘菌素B溶液：在50mL灭菌蒸馏水中溶解500 000国际单位的无菌硫酸盐多粘菌素B。
A2　胰酪胨大豆多粘菌素肉汤　　　　
胰酪胨 17.0g　　　　
植物胨　　　　　　　　　　 3.0g　　　 
氯化钠　　　　　　　　　　 5.0g　　　 
磷酸氢二钾　　　　　　　　 2.5g　　　 
葡萄糖　　　　　　　　　　 2.5g　　　　
蒸馏水　　　　　　　　　　稀释至1000mL　　　
pH7.3±0.1　　
  将上述各成分溶解在蒸馏水中,煮沸2min,分装大试管,每管15 mL,121℃高压灭菌15min。临用时每管加入0.5％多粘菌素B溶液0.1mL混匀即可。　
　注：多粘菌素B溶液：在33.3mL灭菌蒸馏水中溶解500 000国际单位无菌硫酸盐多粘菌素B。
A3　酚红葡萄糖肉汤　　　 
(月示)胨　　　　　　　　　　10.0g　　　 
牛肉膏　　　　　　　　　　 1.0g　　　 
氯化钠　　　　　　　　　　 5.0g　　　 
葡萄糖　　　　　　　　　　 5.0g　　　 
酚　红　　　　　　　　　　0.018g(配成溶液加入)　　　 
蒸馏水　　　　　　　　　　　稀释至1000mL       
pH7.4±0.1　
　将除酚红外的各成分溶解于蒸馏水并稀释至1000mL。校正pH后加入酚红溶液,混匀,分装试管,每管3 mL。121℃高压灭菌10min备用。最终pH7.4±0.1
A4　硝酸盐肉汤　　　　
牛肉膏　　　　　　　　　　 3.0g　　　　
蛋白胨　　　　　　　　　　　5.0g　　　　
硝酸钾　　　　　　　　　　　1.0g　　　　
蒸馏水　　　　　　　　　　　稀释至1000mL　　　　
pH7.0±0.1　
　将上述各成分溶解于蒸馏水并稀释至1000mL。校正pH后分装试管,每管5mL,121℃高压灭菌15min。
A5　营养琼脂　　　　
牛肉膏　　　　　　　　　　　3.0g　　　　
蛋白胨　　　　　　　　　　　5.0g　　　　
琼 脂 稀释至1000mL　　　　
pH7.2±0.1　
　将各成分于蒸馏水中加热溶解。校正pH后分装试管,每管5～7mL；或分装烧瓶,每瓶100～150mL。121℃高压灭菌15 min。将试管取出,制成斜面；如制平板,可将灭菌的琼脂冷至45～50℃倾注灭菌平皿,每皿18～20mL。
A6 L-酪氨酸营养琼脂　　　　
营养琼脂 100mL　　　　 
5％灭菌L-酪氨酸悬液 10mL　
　将100mL营养琼脂溶化,冷至45℃,加入5％的灭菌L-酪氨酸悬液10mL,充分混匀后,分装试管,每管3.5mL。制成的斜面应迅速冷却防止L-酪氨酸分离而出。　
　注：L-酪氨酸悬液：将0.5g酪氨酸加10mL蒸馏水混匀,121℃高压灭菌15min。   
   

 

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