中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中弯曲杆菌检验方法

     中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0175-92 代替ZB X09 011-88 
     Method for detection of campylobacter species in food for export 
    中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中弯曲杆菌检验方法
1　主题内容与适用范围　　
本标准规定了出口食品中弯曲杆菌的检验方法。　　
本标准适用于出口畜肉、禽肉、水产品和牛奶中弯曲杆菌检验。其他出口食品可参照使用。 
2　设备和材料 
2.1　微需氧培养设备：最佳微需氧条件为5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气。可用具双相压力计的厌氧罐、蜡烛缸、气袋或其他可代用的装置。 
2.2　天平：称量2000g,感量0.1g。 
2.3　均质器。 
2.4　离心机：带50mL离心管。 
2.5　显微镜：相差或暗视野。 
2.6　培养箱：25,37和42℃。 
2.7　水浴箱：37℃。 2.8　注射器：20mL。 
2.9　针头过滤器：滤膜孔隙为0.65μm。
2.10 三角烧瓶：50,250和500mL。
2.11 平皿：90或100mm。
2.12　吸管：1和5mL。
2.13 试管：16mm×125mm,带螺旋帽。 
3　培养基和试剂 
3.1　弯曲杆菌增菌肉汤：根据用途,加入1号或2号抗生素溶液制成(A1)。 
3.2　弯曲杆菌分离琼脂(改良Skirrow氏培养基) (A2)。 
3.3　含0.18%琼脂的半固体布氏肉汤(A3)。 
3.4　布氏琼脂(A4)。 
3.5　营养肉汤(A5)。 
3.6　中性红溶液(A6)。 
3.7　3%过氧化氢溶液。 
3.8　氧化酶试验试剂(A7)。 
3.9　亚硝酸盐检测(硝酸盐还原) 试剂(A8)。 
3.10 乙酸铅纸条：将滤纸条浸入饱和乙酸铅溶液中,然后取出,使其干燥。
3.11 硝酸钾。 
3.12 甘氨酸。 
3.13 氯化钠。 
3.14 盐酸半胱氨酸(cysteine-HCl)。 
3.15 马尿酸钠(sodium hippurate)。 
3.16 萘啶酮酸(nalidixic acid): 每个圆纸片含30μg。
3.17 头孢菌新素(又称先锋霉素Ⅰ,cephalothin): 每个圆纸片含30μg。 
3.18 茚三酮(ninhydrin)。 
3.19 丙酮。
3.20 丁醇。
4　增菌
4.1　碎牛肉　
　使用加有按1号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤。称取25g样品,置于均质杯内,加入100mL增菌肉汤,用均质器以8000～10000r/min均质30s。将均质液通过灭菌纱布,倒入一个容量为250mL的三角烧瓶,置微需氧条件下,42℃培养24～48h。 
4.2　净膛全禽和分割禽肉 　
　在一个灭菌容器中,用250mL 灭菌营养肉汤振摇洗涤样品5min。取肉汤,经灭菌纱布过滤,于23000×g、4℃离心20min,或于16300×g、4℃离心30min,弃去上清液,将沉淀物混悬放在250mL三角烧瓶中的100mL加有按1号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤中。培养方法同4.1条。 
4.3　牛奶　
　使用加有按1号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤。称取约40g牛奶放入离心管中,按4.2条中的方法离心。弃去脂肪和上清液,将沉淀物混悬放在250mL三角烧瓶内的100mL,增菌肉汤中,培养方法同4.1条。 
4.4　贝类 　
　使用加有按2号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤。将100g样品和100mL增菌肉汤放入均质杯中,用均质器以8000～10000r/min转速均质30s。用灭菌纱布将均质液过滤。取50mL滤液放在500mL三角烧瓶内的200mL增菌肉汤中,培养方法同4.1条。 
4.5　其他食品 　
　所使用的增菌方法决定于食品的种类。虾、整只海鱼和海鱼片经表面洗涤法(4.2条)处理后,用加有按2号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤增菌。羊肉和猪肉块可先用表面洗涤法处理,再用加有按1号配方配制的抗生素的肉汤增菌。碎肉按4.1条所列方法处理。液体食品按4.3条所列方法处理。各种样品的培养方法均同4.1条。  5　分离和初步鉴定　　取5mL经24～48 h增菌的培养物,以0.65μm孔径滤膜过滤。取经过滤和未经过滤的增菌培养物,分别在分离用琼脂平板上划线接种,各不少于两个平板。将平皿置微需氧条件下42℃培养24～48h。检查平板上有无透明-白色-棕黄色(可能出现浅红色)凸起、边缘不整齐、有时沿接种线向外扩散的菌落。挑取典型菌落制作湿片,用相差(或暗视野)显微镜检查,本菌呈现快速的螺旋样运动。涂片作革兰氏染色镜检时,本菌为革兰氏阴性,如小逗点状,两菌体的末端相接时,呈S形、海鸥展翅形或螺旋状。挑取初步鉴定为弯典杆菌菌落,在布氏琼脂上划线作纯分离。培养方法同上。根据生化、生长特性和抗生素 敏感性试验进行菌株证实。    
   

 

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