中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中弯曲杆菌检验方法——1

6　证实
6.1　生化试验 从用作纯分离的平板挑选2个典型菌落。从每个典型菌落各挑取一满接种环,分别接 种于放在50mL三角烧杯中的4mL布氏肉汤中,置微需氧条件下42℃培养24～28 h。同时接种一份已知阳性培养物,以在整个证实试验中作为对照。在大多数情况下,用于生长试验和生化反应的基础培养基是含0.18%琼脂的布氏肉汤。这种培养基分装在16mm×125mm试管中,每管7mL。从所有布氏肉汤中取出各接种物,滴加0.2～0.3mL于琼脂表面。6.1.1　生长温度试验 　
　接种3管含0.002%中性红(NR)的基础培养基,其中一管置37℃培养,检查在这一温度下的生长情况,并用于观察过氧化氢酶反应。另两管分别置42℃和25℃培养。每日检查有无生长。对未生长者需培养5d,方可作出最后判断。弯曲杆菌的生长应只限于接近培养基表面的一薄层,广泛的生长不是由于弯曲杆菌属细菌所致。
6.1.2　过氧化氢酶试验　
　滴加3%过氧化氢溶液于显示有细菌生长的试管内,出现气泡者为阳性反应。 
6.1.3　氧化酶试验 　
　使用琼脂平板表面经24h培养的生长物(也可取用于抗生素试验的平板),将氧化酶试剂滴于棉拭子上,并用棉拭子去接触表面生长物。在接触点出现深蓝色斑点者为阳性。
6.1.4　硝酸盐还原试验 　
　将供试培养物接种于含1%硝酸钾的基础培养基。置空气中于37℃培养5d。加入亚硝酸盐检测试剂甲液和乙液(A8),出现红色者表明硝酸盐还原成亚硝酸盐,为阳性反应。
6.1.5　1%甘氨酸中生长试验 　
　将供试培养物接种于加有NR和1%甘氨酸的基础培养基。置空气中于37℃培养。每日检查有无生长,对未生长者需培养5 d,方可作出最后判断。 
6.1.6　3.5%氯化钠中生长试验　
　将供试培养物接种于加有NR和3.5%氯化钠的基础培养基。置空气中于37℃培养。每日检查有无生长,对未生长者需培养5 d,方可作出最后判断。
 6.1.7　硫化氢产生试验　
　将肉汤培养物接种于加有0.02%盐酸半胱氨酸的基础培养基,将一根浸有饱和乙酸铅的滤纸条悬于试管的上部(不让滤纸条接触培养基),旋紧试管帽。置空气中于37℃培养。每日检查,观察滤纸条是否变黑,纸条变黑表明有硫化氢产生,为阳性反应。对未出现阳 性反应者需培养5d,方可作出最后判断。 
6.1.8　马尿酸盐水解试验 
　马尿酸盐水解培养基即1%灭菌马尿酸钠溶液,可用试管分装,每管0.4mL,冻存备用。用2mm接种环取一满环在琼脂平板上培养过夜的生长物,接种1%马尿酸钠溶液中,振摇试管以分散培养物,置37℃水浴中放置2h。在每个试管中加入0.5mL茚三酮试剂[将3.5g茚 三酮溶于100mL1:1丙酮和丁醇的混合物中],将试管于室温下放置2 h。出现紫色者为阳性反应。 
6.2　抗生素敏感性试验　
　用灭菌棉拭子将预先准备的布氏肉汤培养物涂布于布氏琼脂平板。将含头孢菌新素(30μg)和萘啶酮酸(30μg)的圆纸片分别贴于平板表面。置微需氧条件下于37℃培养24h,检查有无抑菌圈。 
6.3　根据下表对细菌作出鉴定 弯曲杆菌的特性鉴别 
弯 曲 杆 菌 试验项目
胎儿弯曲杆菌胎儿亚种 空肠弯曲杆菌 结肠弯曲杆菌 NARTC**1)
过氧化氢酶 ＋  ＋  ＋  ＋ 
氧化酶          ＋  ＋  ＋  ＋ 
硝酸盐还原 ＋  ＋  ＋  ＋ 
半胱氨酸形成H2S ＋  ＋  ＋  ＋ 
1%甘氨酸中生长 ＋  ＋  ＋  ＋ 
3.5%氯化钠中生长 －  －  －  － 
37℃生长     ＋  ＋  ＋  ＋ 
25℃生长           ＋  －  －  － 
42℃生长          －  ＋  ＋  ＋ 
马尿酸盐水解 － ＋  － －
萘啶酮酸试验 R**2) S**2) S  R
头孢菌新素试验 S  R  R  R 
注：1) NARTC为抗萘啶酮酸嗜温弯曲杆菌。　　 2) R为耐受; S为敏感。   
   

 

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