中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌——2

附　录 A　　培养基和试剂的配制(补充件)
A1　胰(月示)-亚硫酸盐-环丝氨酸(TSC)琼脂　　
胰(月示)                              15.0g　　
大豆胨 　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
偏亚硫酸氢钠[sodium bisulfite(meta)]   1.0g　　
柠檬酸铁铵　　　　　　　　　　　　　　 1.0g　　
琼脂                                   20.0g　
　加蒸馏水稀释到1000mL，调至pH7.6±0.1，分装到500mL烧瓶中，每瓶250mL。121℃高压灭菌15min，倒平皿前，每250mL培养基(50℃)中，加过滤除菌的0.5％ D-环丝氨酸溶液20.0mL。　
　制作卵黄平板：加50％卵黄乳液20 mL到250 mL含D-环丝氨酸培养基中，倾注到无菌平皿中，每皿约15mL。使用前应将平皿置室温使其干燥。
A2　D-环丝氨酸溶液　
　溶解1gD-环丝氨酸于200 mL磷酸盐缓冲液(c＝0.05mol/L)(pH8.0±0.1)中(不加热)，经0.45μm滤膜过滤除菌。
A3　卵黄乳液　
　用硬刷刷洗鲜蛋，沥干，放70％乙醇中浸泡1h。以无菌操作取出蛋黄，加等体积无菌0.8％氯化钠溶液，混合置4℃贮存。
A4　缓冲动力-硝酸盐培养基　　　
牛肉膏　　　　　　　　　　　　　　　　3.0g　　　
蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
硝酸钾　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 　　              2.5g　　　
半乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
甘油　　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
琼脂                                  3.0g　
　用蒸馏水溶解并稀释到1000mL。调至pH7.3±0.1，分装试管，每管11mL。121℃高压灭菌15min。
A5　乳糖-明胶培养基　　　
胰(月示)　　　　　　　　　　　　　 　15.0g　　　
酵母膏                               10.0g　　　
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　 10.0g　　　
磷酸氢二钠(Na2HPO4)　　              5.0g      
酚红　　　　　　　　　　　　　　　　 0.05g　　 
明胶                                  120.0g　
　用蒸馏水溶解并稀释到1000mL，调至pH7.5±0.1，加入乳糖和酚红。分装试管，每管10 mL。121℃高压灭菌15min。
A6　产芽孢肉汤　　
多价胨(polypeptone)                      15.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　 3.0g　　
可溶性淀粉　　　　　　　　　　　　　　　 3.0g　　
硫酸镁                                   0.1g　　
硫乙醇酸钠　　　　　　　　　　　　　　　 1.0g　　
磷酸氢二钠(Na2HPO4)                      11.0g　
　用蒸馏水溶解稀释到1000mL，调至pH7.8±0.1，分装试管，每管15 mL。121℃高压灭菌15min。
A7　多价蛋白胨-酵母膏(PY)培养基　　
多价胨                                   20.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　
　用蒸馏水溶解并稀释到1000mL, 调至pH6.9±0.1, 分装到带螺帽的试管内,每管9mL。121℃高压灭菌15 min。
A8　硫乙醇酸盐液体培养基　　
胰酪胨                                   15.0g　　
L-胱氨酸　　　　　　　　　　　　　　　　 0.5g　　
氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　 2.5g　　
葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　 5.0g　　
硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸)　　　　　　　　　 0.5g　　
刃天青钠溶液(1:1000)(新鲜配制)　　　　　 1 mL　　
琼脂                                     0.75g　
　将胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母膏和胰胨同1000mL蒸馏水混合，并在阿诺氏消毒器或蒸气浴中加热，直至完全溶解，并加入硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶液，使溶解。如必要可用1mol/L氢氧化钠调整pH，使消毒后的pH在7.1±0.2，加刃天青钠溶液，混合，将培养基分装到150mm×16mm螺旋盖试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。
A9　蛋白胨水　
　在2000 mL蒸馏水中溶解蛋白胨2.0g，调至pH7.0±0.1。在200 mL瓶中分装90 mL，在500 mL锥形瓶中分装225 mL。121℃高压灭菌15min。
A10 亚硝酸盐试剂
a．试剂甲　　在1000mL 5mol/L乙酸中溶解对氨基苯磺酸8g；
b. 试剂乙　　在1000mL 5mol/L乙酸中溶解α-萘酚5g。
A11 缓冲甘油-氯化钠溶液　
　在900mL蒸馏水中溶解氯化钠4.2g，加无水磷酸氢二钾12.4g，无水磷酸二氢钾4.0g和甘油100mL，混合，充分溶解。调至pH7.2。121℃高压灭菌15min。　
　配制双料缓冲甘油溶液(20％)时，用甘油200mL和蒸馏水800mL。   
   

 

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