2结果与讨论
2．1大肠杆菌的生长代谢产热曲线和生长速率常数
在37℃下，采用安瓶法测定了大肠杆菌生长代谢的产热曲线，同时测定了其分别在头孢哌酮钠和头孢哌酮钠舒巴坦钠作用下生长的产热曲线，大肠杆菌在这两种药物作用下的生长代谢受到抑制，并且呈现出浓度依赖性关系．大肠杆菌在头孢哌酮钠作用下的产热曲线的停滞期更长，生长期的最大产热功率更小，这说明大肠杆菌对头孢哌酮钠更敏感．大肠杆菌在指数生长期内，其细胞数按指数规律增加，产热曲线符合指数式生长方程：lnPt=lnP0+kt(1)式中，P0和Pt分别代表细胞在对数生长时的初始点和t时刻的产热功率，k是细胞生长的速率常数．将lnPt对t进行线性回归，其斜率即为生长速率常数(k)，是相关系数．细菌生长的抑制率定义为，I=[(k0一kc)／k0]X100％(2)式中，k。为细菌在没有药物作用时的生长速率常数，k是细菌受到药物浓度为c时抑制的生长速率常数．半抑制浓度IC50，为抑制率为50％时所对应的药物浓度．根据以上定义，计算了头孢哌酮钠和头孢哌酮钠舒巴坦钠对大肠杆菌的抑制率．
2．2生长速率常数k与浓度C的关系
由表1可看出，当头孢哌酮钠的质量浓度为0．01g／mL时，大肠杆菌的生长速率常数k为1．78，这与大肠杆菌在没有药物作用时的k值很接近，其相应的抑制率也较低，说明头孢哌酮钠在该浓度下对大肠杆菌的抑制作用很小．随着头孢哌酮钠浓度的增加，k值逐渐减小，这是由于在加入头孢哌酮钠后，部分大肠杆菌被杀死或被抑制，其余的以较低的生长速率继续进行新陈代谢．用计算机进行拟合，得到k与浓度c的关系为k=一22．40c+1．867，R=-0．9884(3)由式(3)可见，对于头孢哌酮钠，k与c存在较好的线性关系．当头孢哌酮钠的质量浓度达到0.1g／mL时，大肠杆菌的生长完全被抑制，其半抑制浓度Ic。为0．04g／mL．对于头孢哌酮钠舒巴坦钠，随着其浓度的增加，大肠杆菌的k值是先减小后增加(表2)．当头孢哌酮钠舒巴坦钠的质量浓度为0．05g／mL时，大肠杆菌的生长速率常数k为1．09，抑制率为41．1％；大肠杆菌在相同浓度的头孢哌酮钠作用下的k值为0．73，抑制率为60．4％，这从一个方面说明了头孢哌酮钠舒巴坦钠对大肠杆菌的抑制作用比头孢哌酮钠弱．其k与浓度c的关系可用下式表示：k=130．3c一25．54c+1．896，R0．9633(4)
当头孢哌酮钠舒巴坦钠的质量浓度达到0．25Ixg／mL时，大肠杆菌的生长完全被抑制，其最小半抑制浓度IC50为0．05g／mL．与头孢哌酮钠半抑制浓度相比，加入舒巴坦钠并没有增加头孢哌酮钠对大肠杆菌DH5a的抑制作用．
2．3Pm与生长速率常数k的关系
随着头孢哌酮钠浓度的增加，大肠杆菌的最大产热功率P逐渐减小，这与k值逐渐减小相吻合，说明头孢哌酮钠对大肠杆菌的抑制作用比较稳定．将头孢哌酮钠P对其浓度c进行线性拟合，则可得到P与c的关系为P=一2714c+551．9，R=一0．9849(5)如表2所示，对于头孢哌酮钠舒巴坦钠，P随c的变化趋势与其k值随c的变化趋势一致，都是先减小然后再增加．在头孢哌酮钠舒巴坦钠的质量浓度达0．15g／mL时，P值开始上升，这可能是由于头孢哌酮钠舒巴坦钠对大肠杆菌的抑制作用是暂时的，在经过相对较长的停滞期后，大肠杆菌又会重新生长，并伴随着释放出较高的热量．头孢哌酮钠舒巴坦钠P与其浓度的关系可表示为P=374470c（3）一78310c（2）+2438c+542．7，R（2）=0．9999(6)
2．4t与生长速率常数k的关系
由表1可知，随着头孢哌酮钠浓度的增加，大肠杆菌的最大产热功率P所对应的时间t逐渐增加．在较低质量浓度范围内(0．1～0．05ug／mL)，t增加趋势较为平缓；当头孢哌酮钠的质量浓度较高(>0．05ug／mL)时，t增加幅度较大t与c的关系为t=(1．182×10（-7）-1．31lc（2）+33188c+2194，R=0．9760(7)对于头孢哌酮钠舒巴坦钠，随着其浓度的增加，t也逐渐增加(见表2)，t与c的关系为t=95613e+3758e+2261，R=0．9586(8)
综上所述，采用微量量热法测定了头孢哌酮钠和头孢哌酮钠舒巴坦钠在37℃时对大肠杆菌DH5a代谢作用的产热曲线．结合k，t，P与c的关系发现，头孢哌酮钠对大肠杆菌DH5a的抑制作用要比头孢哌酮钠舒巴坦钠强，即舒巴坦钠的加入并没有增强头孢哌酮钠对大肠杆菌DH5a的抑制作用．同时，实验结果表明，微量量热法是一种有效的体外筛选药物的方法，可指导药物设计、揭示药物与微生物间的相互作用机理，并且对指导医药在临床上合理使用抗生素等方面有重要的应用和理论价值．
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