微生物平衡指数——肠道微生物2

2、材料与方法
  为了研究正常粪便中微生物菌群的组成，分别从224头10周龄仔猪和256头16～20周龄生长猪中采集各头试验猪的粪便样本，样本采集后不进行混合。试验猪饲养在正常的生产条件下，同时参加饲喂数种不同饲料组成的饲养试验。试验猪分数个饲喂组淇中试验仔猪分17个组，生长猪组分16组)，每组有12～18头猪。试验时测定每组猪的平均日增重fDw。
  另外，为研究水解啤酒酵母ProgutTM(芬兰SuomeRehu公司生产)对粪便中微生物菌群和动物生长的影响究，特收集60头10周龄仔猪的粪便样本。试验时将这6头10周龄仔猪分成5个饲喂组，每组12头；其中2个组的仔猪从5周龄开始饲喂常规的断奶料(对照料)，另3个组的仔猪饲喂相同的断奶料，但在断奶料中添加水解酵母(i式验料)=分别测定各组仔猪的平均日增重。
   粪便样本采集后，进行细菌细胞分离，并利用一种基于FCM、16S—rRNA杂交技术和DNA染色技术的方法进行分析rVaahtovuo，2005)。粪样保存在磷酸盐缓冲盐水(Phosphate—BufferedSaline，PBS)中，细菌用离心法分离。细菌细胞用多聚甲醛定型后，再用PBS冲洗数次，重新保存在含50％乙醛的PBS中。定型后的细菌细胞置于一20℃冰箱保存，用能作为各种细菌属和细菌群靶子的核苷酸探针进行分子杂交(Lay，2005；Sghir，2000；Suau，2001)，随后根据SYTOX。DNA染色法(分子探针，美国俄勒冈,Jq恸：金公司生产)染色，用流式细胞术分析。此外，统计总细菌数(DNA染色的细菌数量)，以综合方式描述微生物菌群的MBI值可根据以下方程(专利保护)计算获得：MBI--(A+B)／(c+D)。式中：A为双歧杆菌数；B为粪球菌属细菌(FaeealibaeteriumPrausnitzil)数；C为类杆菌属一卟啉菌属一普氏菌属菌群(BacteroidesPorphyromonasPre—votellagroup)的细菌数；D为肠道菌群细菌数。分别对每个样本的细菌数量和微生物平衡指数值进行统计。
   利用t柃验分析两个具有不等方差的独立样本集，用Pearson氏相关系数和回归分析法评估微生物平衡指数与平均日增重间的相关性，所有分析结果的显著性差异均设为P<O．05。   
   

 

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