7 报告结果 生化试验符合副溶血性弧菌特性的菌株,按增菌培养阳性管数,应用表3(3管法),查出每100 g样品中的副溶血性弧菌MPN值。检验结果报告为每100g样品中副溶血性弧菌的最近似值为××个。
注:当报告每100g样品中副溶血性弧菌的最近似值时,可将查表所得数字乘以100。
8、神奈川现象及血清学实验(根据需要进行)
8.1 神奈川现象试验
8.1.1 以接种环将30g/L氯化钠胰胨水培养物点种于充分干燥的我妻氏血琼脂平板上。可先在平板背面以玻璃铅笔划出若干小区,使一个平板能做多个试验。
8.1.2 37℃培养18～24h。
8.1.3 在24 h以内观察结果,阳性结果在菌落周围有一清晰的透明环。
8.2 血清学鉴定:副溶血性弧菌的抗原分为O、K、H三种。血清学分型以O及K抗原进行鉴定。
8.2.1 K 抗原凝集试验
8.2.1.1 将经生化试验证实为副溶血性弧菌的菌株转种在两支30g/L氯化钠普通琼脂斜面上,37℃培养18 h。
8.2.1.2 以2mL 20g/L氯化钠溶液洗下一支琼脂斜面培养物,制成浓厚菌悬液。
8.2.1.3 先以K多价抗血清与菌悬液进行玻片凝集试验。在1min内观察反应。阳性凝集者,另进行自然凝集试验,若自然凝集试验为阴性,再以该K多价抗血清中的单因子K抗血清进行试验。
8.2.1.4 与单因子K抗血清出现阳性凝集的,为该菌株的相应K抗原。
8.2.2 O抗原凝集试验
8.2.2.1 以20g/L氯化钠〔含5％(V/V)甘油〕溶液洗另一支琼脂斜面培养物,将菌悬液经 121℃高压灭菌1 h。
8.2.2.2 以离心沉淀法去上清液,再以20 g/L氯化钠溶液4000r/min离心15 min,洗两次沉淀后加0.5mL 2％氯化钠溶液制成浓厚的菌悬液。
8.2.2.3 以已知K 抗原对应的O 群抗血清进行玻片凝集试验,同时以20 g/L氯化钠溶液代替抗血清做自然凝集对照试验。
8.2.2.4 与抗血清出现强阳性凝集的,为该菌株的O抗原。
8.2.3 根据以上血清学试验结果,可报告为发现副溶血性弧菌O×K×血清型。
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