我国行业标准-出口食品中霍乱弧菌检验方法——2.1

      A5  T1N1琼脂
胰胨                        10.0g
氯化钠                      10.0g
琼脂                        20.0g
蒸馏水                      1000mL
将各成分加热蒸馏水中，充分混匀，搅拌加热直至煮沸。121℃高压灭菌15min。最终pH（7.2±0.2）。倾注平板备用。
在上项成分中改变氯化钠的含量（T1N0：不加氯化钠；T1N3：氯化钠为30.0g），去除琼脂可制成T1N0和T1N3肉汤。
A6  精氨酸葡萄糖斜面琼脂（AGS）
蛋白胨                      5.0g
酵母浸膏                    3.0g
胰胨                        10.0g
氯化钠                      20.0g
葡萄糖                      1.0g
精氨酸                      5.0g
柠檬酸铁胺                  0.5g
硫代硫酸钠                  0.3g
溴甲酚紫                    0.02g
琼脂                        13.5g
蒸馏水                      1 000mL
将各成分加入蒸馏水中，充分混匀，搅拌加热至煮沸约1min。最终pH(6.8~7.0)。分装13mm×100mm试管，121℃高压灭菌15min，高压后制成高层斜面备用。
A7  Hugh-Leifon葡萄糖肉汤（HLGB）
蛋白胨　　　　　　　　　　　5.0g　　
酵母浸膏　　　　　　　　　　0.5g　　
氯化钠   　　　　　　　　   30.0g　　
葡萄糖　　　　　　　　　　　10.0g　　
溴甲酚紫                  　0.015g　　
蒸馏水　                    1 000Ml
将各成分（除溴甲酚紫外）加入蒸馏水中，充分混匀，搅拌加热溶解，调节pH7.4，加入溴甲酚紫，混匀，分装于15mm×150mm试管的三分之一容量，121℃高压灭菌15min。
接种后覆盖约1mL灭菌矿物油以检查葡萄糖发酵。
A8  赖氨酸脱羧酶肉汤（Moeller）
蛋白胨                     5.0g
牛肉浸膏                   5.0g
葡萄糖                     0.5g
溴甲酚紫                   0.01g
甲酚红                     0.005g
吡哆醛                     0.005g
蒸馏水                     1 000mL
将各成分溶于蒸馏水中,轻轻搅拌加热至溶解。溶解L－赖氨酸10.0g。分装3mL于13mm×100mm试管中。另以不加氨基酸的基础液作试验对照。121℃高压灭菌10min，接种后覆盖约1mL矿物油。最终pH（6.0±0.2）。
A9  MR-VP肉汤
(月示)胨　　　　　　　　　  7.0g　　
葡萄糖　　　　　　　　　　　5.0g　　
磷酸氢二钾                  5.0g　　
蒸馏水                      1000.0mL　　
将各成分溶于800mL蒸馏水中,微热过滤，冷却至20℃，稀释到1000mL。121℃高压灭菌12min～15min。最终pH（6.9±0.2）。
A10  ONPG胨水
1％蛋白胨水（pH7.5）        300.0mL
ONPG溶液                  100.0mL
  称取磷硝基酚-β-D-半乳糖苷0.6g溶于0.01mol/L磷酸氢二钠缓冲液100mL中，过滤除菌，加入300mL灭菌蛋白胨水中混匀，分装试管，每管约2mL～3mL。避光保存，如变黄应弃去。
  接种后培养液变黄为阳性。
A11  Andrade氏糖类肉汤和指示剂
基础液：
牛肉浸膏                   3.0g
蛋白胨                     10.0g
氯化钠                     10.0g
蒸馏水                     1 000mL
调节pH值（7.2±0.2）。在121℃高压灭菌15min。
Andrade氏指示剂：
酸性品红                   0.2g
蒸馏水                     100.0g
1mol/L氢氧化钠             16.0mL
使用前要脱色。如果需要加1mL～2mL氢氧化钠溶液，加10mL指示剂到1L基础液中。
糖储备液：
用葡萄糖、乳糖、蔗糖和甘露糖配制10％溶液。用卫矛醇、水杨素和其他糖类配制5％溶液。通过0.20μm滤膜过滤除菌。用基础液按1：10稀释糖溶液，加Andrade氏指示剂至所需浓度，混合。
A12  氧化酶试剂
    溶解1.0g二盐酸四甲基对苯二胺于盛有100mL水的暗色玻璃瓶中，冰箱内存放不超过7天，勿需高压灭菌。阳性培养物在1min内产生黑紫色斑点。
A13  粘丝试验溶液
     溶解0.5g去氧胆酸钠于100mL水中，拧紧瓶盖保存于冰箱中。勿需高压灭菌。
     霍乱弧菌在该溶液中被乳化后，1min内形成粘液样团块。当粘块从玻片上被拉出2cm～3cm时成粘丝。   
   
   
   

 

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