微生物生长量的测定

                          微生物生长量的测定
    既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定生长的方法也部直接地以此为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。
    （一）稀释平板菌落计数法
    是一种最常用的活菌汁数法。取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在其凝固前均匀混合，或涂布于已凝固的固体培养基平板上．在最话条件下培养后，从平板上出现的菌落数乘上菌液的稀释度，即可计算出原菌液的含菌数。在一个9cm直径的培养皿平板上．一般以出现50~500个菌落为宜。
    这种方法在操作时，有较高的技术要求。其中最重要的是应使样品充分混匀，井让每支栘液管只能接触一个稀释度的菌液，有人认为，对原西液浓度为10的9个/mL的微生物来说，如果第一次稀释即采用10的-4级，第二次采用10的-2级，然后再吸此菌液o．2mL进行表面凃布和菌落计数，则所得的结果最为精确。其主要原因是，一般的吸管壁常因存在油脂而影响计数的精确度（有时误差竞高达15%）。这一稀释过程的示意图详见实验技术。
    (二）血球计数板法
    血球汁数板法是用来测定一定容积中的细胞总数目的常规方法。这种方法的特点是测定简便、直接．快速，但测定的对象有一定的局限性，只适合于个体较大的微生物种类，如
酵母菌．霉菌的孢子等。此外测定结果是微生物个体的总数．其中包括死亡的个体和存活的个体．要想测定活菌的个数．还必须借助其他方法配合。
   （三）称干重
    称干重可用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%一2%。在离心法中，将待测培养液放人离心管中．用清水离心洗涤1—5次后．进行干燥。干燥温度可采用105、100℃或红外线烘干．也可在较低的温度（80℃或40℃）下进行真空干燥．然后称干重。以
细菌为例，一个细胞一般重约10的-12~10的-13g。
    另一种方法为过滤法。丝状真菌可用滤纸过滤．而细菌则可用醋酸纤维膜等滤喷进行过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤。然后在40℃下真空干燥，称干重；以大肠杆菌为例，在液体培养物中，细胞的浓度可达2*10的8个/mL。100ml培养物可得10一90mg干重的
细胞。
    这种方法较适合于丝状微生物的生长量的测定，对于细菌来说，一般在实监室或生产实践中较少使用。
    （四）比浊法
    细菌培养物在其生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高．最古老的比浊法是采用MoFarland比浊管。这是用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，分别代表10个相对的细菌浓度(预先用相应的细菌测定）。某一未知浓度的菌液只要在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，如果两者透光度相当。即可目测出该菌液的大致浓度。
    如果要做精确测定，则可用分光光度计进行。在可见光的450~650nm波段内均可测定。为了对某一培养物内的菌体生长做定时跟踪，可采用不必取样的侧壁三角烧瓶来进行。测定时，只要把瓶内的培养液倒入侧臂管中．然后将此管插入特制的光电比色计比色座孔中．即可随时测出生长情况，而不必取用菌液。
    以上介绍了若干测定微生物的生长量或计算繁殖数的主要方法．其中，最常用的为称干
重．测浊度用分光光度计，用计数板测总菌数以及用平板菌落计数法测活菌数等方法。必须指出的是，不管用什么方法，鄙有其优缺点和使用范围。所以，在使用前，一定要根据自己的研究对象和研究目的的不同，选用最合适的方法。
  
   

 

上一篇：微生物生长的概念

下一篇：微生物的生长规律一