1、主题内容与适用范围
本标准规定了冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)的检验方法。
本标准适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。其他食品可参照使用。
2 样品制备及增菌培养
2.1 肉类
2.1.1 如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15 min,或在2～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验,应置于—15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品,置于4℃冰箱保存。
2.1.2 以无菌操作,称取剪碎后的瘦肉样品25 g,置于灭菌均质杯内,加入25 mL,缓冲胨水增菌液,以8000～10000r/min均质1 min,移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液,调pH至6.8±0.2,于37℃水浴培养4h (以增菌液达到37℃时算起),进行前增菌；其后,移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内,摇匀,于42±1℃培养20± 2h,进行选择性增菌。必要时,同时另称取25g剪碎的瘦肉样品,加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液,同样进行均质。其后,移入盛有200mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6, 用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2 h,进行直接选择性增菌。
2.2 蛋品
2.2.1 冰蛋品(冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄)
2.2.1.1 按2.1.1解冻和保存样品。
2.2.1.2 以无菌操作称取样品25 g,型于盛有225 mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2 h,进行直接选择性增菌。
2.2.2 干蛋品(鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉)
以无菌操作将样品碾碎后,称取25g加入盛有225 mL缓冲胨水增菌液的500 mL广口瓶内(瓶内事先盛有直径3～4mm的玻璃珠约50粒),振荡10min,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L 氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养20～24h,进行前增菌；其后,移取10 mL转种于盛有100mL 亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250 mL玻璃瓶内,混匀,于42±1℃培养20±2h,进行选择性增菌。
3 分离培养
3.1 将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环分别挑取1环,分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个(必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用), 于37℃培养24±2h。
3.2 观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落,如无典型或可疑菌落,应再继续培养24±2h。
沙门氏菌属的菌落特征见表1。
表1 沙门氏菌属菌落特征
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琼脂
平板
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菌 落 特 征
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沙 门 氏 菌
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亚 利 桑 那 菌
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亚硫酸铋琼脂
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棕褐色或灰色至黑色,有时有金属光泽,周围培养基呈棕色或黑色,有些菌株呈灰绿色,周围培养基不变或微变暗
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黑色,周围培养基一般不变黑或微变黑。有些菌株呈灰绿色,带黑心或不带黑心
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胆硫乳琼脂
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无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。有些菌株无色半透明中心
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乳糖阴性菌株,相似于沙门氏菌菌落,乳糖阳性菌株为粉红色有暗色
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亚利桑那菌琼脂
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黄色有暗蓝色中心,周围培养基中有黄色沉淀物包围时,菌落缘可为浅黄色
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粉红色有黑色中心,有时为全黑色，周围培养基呈红色,被发酵卫矛醇或庶糖的细菌
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