进出口行业标准-出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)——6

6.12 V-P半固体琼脂(VP)
6.12.1　制备
蛋白胨 12.0g
酵母膏　 1.0g
葡萄糖 10.0g
氯化钠　 5.0g
琼　脂 3.0g
蒸馏水 100.0mL
将各成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.3 ±0.1,分装试管(12mm×100mm),每管1～1.5mL,高压灭菌121℃,10min,灭菌后立即取出冷却备用。
6.12.2　试验判断 
6.12.2.1　配制试剂
甲液：　　
α-萘酚　　　 6.0g
无水乙醇溶液 100.0mL
乙液：　　
氢氧化钾       40.0g
肌　酸　　　　 0.3g
蒸馏水         100.0mL
先将氢氧化钾溶于水中,再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱中,可使用2个月,
6.12.2.2　试验
接种幼嫩待试菌,于37℃培养24±2h,将甲液0.2mL(约6滴)加入试管中,摇混均匀, 再加乙液0.1mL(约3滴),再摇混均匀。
6.12.2.3　判断
阳性反应立即或在15min内呈现红色,阴性为铜色。阴性结果在1 h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失,此仍作阳性反应。
6.13吲哚培养基(Ⅰ):
6.13.1　制备
蛋白胨 10.0g
氯化钠　　　 5.0g
DL-色氨酸　 1.0g
蒸馏水　　　1000.0mL
除DL-色氨酸外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10 min。另将DL-色氨酸加入约4mL 1mol/L氢氧化钠溶液中,待溶解后,再将两液进行混合并加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1,分装试管(12mm×100mm),每管1～1.5mL,高压灭菌121℃,15min。
6.13.2　试验与判断
6.13.2.1　配制试剂
柯凡克试剂：　
对二甲氨基苯甲醛 10.0g
戊　醇 150.0mL 　　
浓盐酸 50.0mL
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中,缓慢搅拌加入盐酸,加热至60℃, 呈深黄色,静置6～7h,变成黄色即可使用。试液宜小量配制,不用时保存于4℃冰箱内。久存后试液变成黄褐色不可使用。
6.13.2.2试验接种待试菌,于37℃培养24±2h,滴加柯凡克试剂0.1mL。 
6.13.2.3判断　　
阳性反应出现红色环；阴性为黄棕色环。    
   

 

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