进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法——3

6.5.10  糖发酵试验
将TSB-YE肉汤培养物分别接种于0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内，于35℃培养21h～48h,阳性继续培养到第5天，李斯特氏菌不产气。
6.5.11  尿素酶试验    
用TSB-YE肉汤培养物穿刺接种于尿素酶琼脂斜面上，于35℃培养5d，逐日观察李斯特氏菌成尿素酶试验阴性反应，斜面无颜色变化
6.5.12  协同溶血试验（caMP）
在羊血琼脂平板上各划一直线，使两线平行，在两平行线上分别接种β型溶血金黄色葡萄球菌（S.aureus）ATCC4944和马红球菌（R.equi）, ATCC6939培养基，在该两线之间垂直划线接种待测菌培养基，与两线相近但不相交，于35℃培养24h~48h后，观察相交处溶血情况，单核细胞增生李斯特氏菌和西尔李斯特氏菌（L.seeligeri）在靠近金黄色葡萄球菌接种点附近的的容血增强，可见有明显的箭头状溶血现象，其他李斯特氏菌不产生溶血。
6.5.13 API鉴定试验
API鉴定实验可代替6.5.7~6.5.12试验，具体方法；检查6.5.1~6.5.4中符合李斯特氏菌特征的菌株，传代分离于7%羊血琼脂平板，按API Listerin鉴定系统说明书所述方法进行鉴定，应用说明书提供的数值编码表得到鉴定结果。
6.5.4血清学检验
将TSB-YE肉汤培养基接种到3mlTSB-YE肉汤中，于35℃培养24h接种2支TSA-Y琼脂斜面，于35℃培养24h，用3ml. 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液将斜面菌苔洗下，菌悬液于80℃水溶中加热1h，以2500r/min离心30min，弃去2ml上清液，将剩余液与沉淀混匀制成菌悬液血清学玻片凝集实验，
李斯特氏菌菌种的血清型见表2

                      表2斯特氏菌菌种的血清型

中文菌名             学名               血清型
单核细胞增生李斯特氏菌L．monocylogenes1/2A,1/2B,1/2C,3A,3B,3C,4AB,4B,4C,4D,4E,7绵羊李斯特氏菌 L.ivanavit       5
英诺克李斯特氏菌 L.innocna       4AB,6A,6B,Un
威尔李斯特氏菌 L.welshimeri  6A,6B
西尔李斯特氏菌 L.seeligeri  1/2B,4C,4D,6B,Un
格氏李斯特氏菌 L.grayi
Un——未命名

7 菌量控制
每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株（如杆菌和链球菌等）进行质量控制，在6.2样品置备的同时，在一个作为空白对照的FB1增菌液中加入新鲜配制的每毫升含有10个~100个单核细胞增生李斯特氏菌的阳性标准菌株培养物稀释液1ml，和阴性菌株培养物，按检验程序进行同步检验。
8 报告结果
8.1 协同溶血试验、血清学试验可根据需要进行，常规检验可不进行这些试验。
8.2 单核细胞增生李斯特氏菌与其他李斯特氏菌种的鉴别见表1
8.2.1 报告阳性结果：检出单核细胞增生李斯特氏菌。
8.2.2 报告阴性结果：未检出单核细胞增生李斯特氏菌。   
   

 

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